Avainero Elisan ja Elispotin välillä on se, että Elisa on entsyymisidottu immunosorbenttimääritys, joka määrittää erittyvien signaaliproteiinien kokonaispitoisuuden, kun taas Elispot on entsyymisidottu immunosorbenttimääritys, joka havaitsee yksittäisiä sytokiineja erittävät solut.
Elisa ja Elispot ovat kaksi entsyymikytkentäistä immunosorbenttimääritystä, joita käytetään laaj alti lääketieteessä, kasvipatologiassa, biotekniikassa ja eri lääketeollisuudessa. Näissä tekniikoissa proteiinianalyytin havaitaan sitä vastaan suunnatulla vasta-aineella. Elisa on suosituin laboratorioissa käytettävä entsyymi-immunosorbenttimääritys. Toisa alta Elispot on entsyymisidottu immunosorbenttimääritys, jota ei käytetä Elisan sijasta, vaan käytetään Elisan lisäksi laboratorioissa.
Mikä Elisa Assay on?
Elisa on entsyymikytkentäinen immunosorbenttimääritys, joka määrittää erittyvien signaaliproteiinien kokonaispitoisuuden. Se on laaj alti käytetty analyyttinen biokemiallinen määritys, jonka Engvall ja Perlmann kuvasivat ensimmäisen kerran vuonna 1971. Tämä tekniikka käyttää kiinteän faasin tyyppistä entsyymi-immunomääritystä tietyn proteiinin läsnäolon havaitsemiseksi nestemäisessä näytteessä käyttämällä tätä spesifistä proteiinia vastaan suunnattuja vasta-aineita. Tämä määritys on yleisesti käytetty diagnostinen työkalu lääketieteessä, kasvipatologiassa ja biotekniikassa.
ELISA-testin mekanismi
Useimmissa ELISA-testissä tuntematon määrä antigeeniä immobilisoidaan alussa kiinteälle alustalle (mikrolitralevylle). Sitten sopiva primäärinen vasta-aine levitetään kiinteän tukipinnan päälle. Tämä vasta-aine muodostaa kompleksin antigeenin kanssa (antigeeni-vasta-ainekompleksi). Antigeeniin sitoutunut primaarinen vasta-aine voidaan havaita sekundaarisella vasta-aineella, joka on liitetty entsyymiin biokonjugaation kautta. Elisa-testin viimeisessä vaiheessa lisätään entsyymin substraattia sisältävä aine. Jos primaarinen vasta-aine sitoutuu kunnolla antigeeniin, substraatti tuottaa havaittavan värinmuutoksen. Viime kädessä tämä kvantifioi näytteen antigeenin.
Kuva 01: Erityyppiset Elisa
Lisäksi Elisaan on erilaisia lähestymistapoja, kuten suora Elisa ja epäsuora Elisa. Tällä hetkellä erilaisia Elisa-testejä käytetään ihmisen patogeenien, kuten Mycobacterium tuberculosis, rotaviruksen, hepatiitti B -viruksen, hepatiitti C -viruksen, enterotoksiinia tuottavan E. colin, HIV:n ja SARS-CoV-2:n havaitsemiseen.
Mikä Elispot Assay on?
Elispot on entsyymikytkentäinen immunosorbenttimääritys, joka havaitsee yksittäisiä sytokiineja erittävät solut. Cecil Czerkinsky kuvasi ELISpotin ensimmäisen kerran vuonna 1983. Se on eräänlainen määritys, joka keskittyy yksittäisen solun sytokiinierityksen tiheyden kvantitatiiviseen mittaamiseen. Se luokitellaan myös tekniikaksi, joka käyttää vasta-aineita biologisen tai kemiallisen proteiinianalyytin havaitsemiseen. Fluorospot-määritys on muunnelma Elispot-määrityksestä, joka käyttää fluoresenssia useiden analyyttien (enemmästä salaavia proteiineja) analysoimiseen.
Elispot-testin mekanismi
Tässä mekanismissa sytokiinispesifisiä monoklonaalisia vasta-aineita lisätään aluksi mikrolitralevyjen kuoppiin. Sitten halutut havaitut solut lisätään kuoppiin. Myöhemmin soluja inkuboidaan. Solu-inkuboinnin aikana solujen annetaan reagoida kaikkiin ärsykkeisiin ja erittää sytokiinia. Inkuboitujen solujen erittämät sytokiinit kiinnittyvät vasta-aineisiin, koska soluja ympäröivät sytokiinispesifiset monoklonaaliset vasta-aineet.
Kuva 02: Elispot-määritys
Näiden sytokiinispesifisten monoklonaalisten vasta-aineiden havaitsemiseksi kuoppaan lisätään biotinyloituja spesifisiä detektiovasta-aineita. Biotinyloidut spesifiset detektiovasta-aineet vangitsevat sytokiinispesifiset monoklonaaliset vasta-aineet kuopissa. Lisäksi streptavidiini-entsyymi-konjugaatteja lisätään kuoppiin sitoutumaan havaitsevien vasta-aineiden kanssa. Viimeisessä vaiheessa kuoppiin lisätään erityisiä substraatteja. Entsyymikonjugaattien ja -substraattien reaktiot tuottavat erillisiä pisteitä kuoppiin. Nämä erilliset kohdat luetaan automaattisella ELISpot-lukijalla. Viime kädessä tämä laskee sytokiinien erittymistiheyden edelleen.
Mitä yhtäläisyyksiä Elisan ja Elispotin välillä on?
- Ne ovat molemmat entsyymi-immunosorbenttimäärityksiä.
- Molemmat määritykset havaitsevat tietyt proteiinianalyytit.
- Näissä määrityksissä käytetään spesifisiä vasta-aineita proteiinianalyyttien tunnistamiseen.
- Molemmat määritykset käyttävät entsyymejä ja substraatteja.
- Niitä käytetään diagnostisena työkaluna lääketieteellisissä laboratorioissa.
Mitä eroa Elisalla ja Elispotilla on?
Elisa on entsyymikytkentäinen immunosorbenttimääritys, joka määrittää erittyvien signaaliproteiinien kokonaispitoisuuden. Toisa alta Elispot on entsyymisidottu immunosorbenttimääritys, joka mittaa yksittäisiä sytokiinia erittäviä soluja. Joten tämä on tärkein ero Elisan ja Elispotin välillä. Lisäksi Elisa-testissä antigeeni immobilisoidaan ensin mikrolitran kuoppiin. Sitä vastoin Elispot-testissä vasta-aine immobilisoidaan ensin mikrolitran kuoppiin. Tämä on siis toinen ero Elisan ja Elispotin välillä.
Alla oleva infografiikka esittää yksityiskohtaisen analyysin Elisan ja Elispotin eroista taulukkomuodossa.
Yhteenveto – Elisa vs Elispot
Elisa ja Elispot ovat kaksi entsyymikytkettyä immunosorbenttimääritystä, joita käytetään laaj alti lääketieteessä, kasvipatologiassa, biotekniikassa ja eri lääketeollisuudessa. Elisa havaitsee ligandin (proteiinin) esiintymisen nestenäytteestä mitattavaa ligandia vastaan suunnatuilla vasta-aineilla. Elispot-määritys on laaj alti käytetty menetelmä immuunivasteiden seurantaan. Se havaitsee yksittäisiä sytokiinia erittävät solut vasta-aineiden avulla. Se on sekä immunomääritys että biomääritystekniikka. Tämä on siis yhteenveto Elisan ja Elispotin erosta.
