Avainero – suora vs. epäsuora ELISA
Entsyymi-immunomääritys (ELISA), joka tunnetaan myös nimellä entsyymi-immunomääritys, on serologinen testi, joka havaitsee vasta-aineita verestä. Sitä käytetään diagnostisena työkaluna selvittääkseen, onko potilas altistunut tietyntyyppiselle virukselle tai muulle tartunta-aineelle (antigeenille) ja onko elimistö tuottanut vasta-aineita infektiota vastaan. ELISA voi myös tunnistaa aiemmat ja nykyiset infektiot. Siksi lääkärit käyttävät usein ELISA-testiä esiseulontatestinä ennen sairauksien syvällistä analyysiä. Tämä testi voidaan tehdä laboratoriossa ottamalla potila alta verinäyte. ELISA-testejä on kahta tyyppiä: suora ELISA ja epäsuora ELISA. Tärkein ero suoran ja epäsuoran ELISA:n välillä on, että epäsuora ELISA on herkempi ja vaatii sekundaarisen vasta-aineen lisäämisen, kun taas suora ELISA on vähemmän herkkä ja käyttää vain primääristä vasta-ainetta.
Mikä on Direct ELISA?
ELISA on sairauden diagnostinen testi, joka suoritetaan tiettyjen antigeenien tai vasta-aineiden havaitsemiseksi veressä. Se tehdään levyanalyysinä. Se käyttää vasta-aineita, jotka on yhdistetty helposti määritettäviin entsyymeihin. Antigeenien läsnäolo seeruminäytteessä sitoutuu spesifisiin vasta-aineisiin, jotka liittyvät entsyymeihin. Viimeisessä vaiheessa lisätään spesifinen substraatti reagoimaan entsyymin kanssa. Entsyymi muuttaa substraatin värilliseksi tai signaalia tuottavaksi tuotteeksi. Värinmuutos kemiallisessa substraatissa paljastaa tietyn vasta-aineen läsnäolon seeruminäytteessä. Suora ELISA-testi käyttää vain primääristä vasta-ainetta, joka on liitetty entsyymiin. Sitoutuessaan antigeeniin se muuttaa nopeasti väriä, mikä osoittaa tartunnanaiheuttajan läsnäolon veressä. Signaalien intensiteetti on kuitenkin heikompi suorassa ELISA:ssa, koska epitoopit rajoittuvat antigeenien sitoutumiseen. Tästä syystä suora ELISA on vähemmän herkkä kuin epäsuora ELISA.
Kuva 01: Suora ELISA-testi
Mikä on epäsuora ELISA?
ELISA voidaan suorittaa käyttämällä kahden tyyppisiä vasta-aineita, nimittäin; primaarinen vasta-aine ja sekundaarinen vasta-aine. Epäsuora ELISA-työkalu käyttää molempia vasta-ainetyyppejä signaalien vahvistamiseen paremman havaitsemisen saavuttamiseksi. Epäsuora ELISA-tekniikka suoritetaan seuraavasti.
- Levyjä inkuboidaan antigeenien kanssa ja pestään epäspesifisen sitoutumisen estämiseksi.
- Sitten primaariset vasta-aineet lisätään ja pestään.
- Entsyymikytketty sekundaarinen vasta-aine lisätään ja pestään.
- Substraatti lisätään ja sen annetaan reagoida entsyymien kanssa.
- Signaalit havaitaan ja spesifisen antigeenin läsnäolo tai puuttuminen näytteestä tunnistetaan.
Epäsuorassa ELISA-testissä useat sekundaariset vasta-aineet voivat sitoutua yhteen primaariseen vasta-aineeseen. Sekundaariset vasta-aineet on liitetty helposti määritettäviin entsyymeihin. Siksi yksi sidos voi antaa vahvan signaalin useamman kuin yhden vuorovaikutuksen vuoksi. Tästä syystä epäsuora ELISA on herkempi kuin suora ELISA. Epäsuora ELISA voi kuitenkin tuottaa epäspesifisiä signaaleja sekundaaristen vasta-aineiden ristireaktioiden vuoksi.
Kuva 02: Epäsuora ELISA-testi
Mitä eroa on suoralla ja epäsuoralla ELISA:lla?
Suora vs epäsuora ELISA |
|
| Suora ELISA on vähemmän herkkä kuin epäsuora ELISA. | Epäsuora ELISA on herkempi. |
| Kestetty aika | |
| Suora ELISA-testi on nopea prosessi. | Epäsuora ELISA on aikaa vievä. |
| Vasta-aineiden käyttö | |
| Vain yhden tyyppisiä vasta-aineita (primaarisia vasta-aineita) käytetään suorassa ELISA:ssa. | Epäsuorassa ELISA:ssa käytetään primäärisiä ja sekundaarisia vasta-aineita. |
| Linkitä entsyymien kanssa | |
| Primääriset vasta-aineet ovat yhteydessä entsyymeihin. | Toissijaiset vasta-aineet ovat yhteydessä entsyymeihin. |
| Toisten vasta-aineiden ristireaktiivisuus | |
| Suora ELISA eliminoi toisten vasta-aineiden ristireaktiivisuuden. | Epäsuoraan ELISAan vaikuttaa toisten vasta-aineiden ristireaktiivisuus. |
| Signaalit | |
| Signaalit ovat heikkoja verrattuna epäsuoraan ELISAan. | Signaalit vahvistetaan epäsuorassa ELISA:ssa. Siksi se on helppo havaita. |
Yhteenveto – suora vs. epäsuora ELISA
ELISA on biokemiallinen tekniikka, jota käytetään pääasiassa immunologiassa vasta-aineen tai antigeenin havaitsemiseen potilaan verinäytteestä. Se voidaan suorittaa kahdella prosessilla, jotka tunnetaan nimellä suora tai epäsuora ELISA. Suora ELISA-testi käyttää vain primaarisia vasta-aineita antigeenin havaitsemiseen, kun taas epäsuora ELISA käyttää sekä primaarisia että sekundaarisia vasta-aineita. Suorassa ELISA:ssa primaariset vasta-aineet leimataan, kun taas epäsuorassa ELISA:ssa sekundaariset vasta-aineet leimataan. Tämä on ero suoran ja epäsuoran ELISA:n välillä.
