Avainero suoran ja epäsuoran immunofluoresenssin välillä on, että suorassa immunofluoresenssissa käytetään yhtä vasta-ainetta, joka toimii kiinnostavaa kohdetta vastaan, kun taas epäsuorassa immunofluoresenssissa käytetään kahta vasta-ainetta kiinnostavan kohteen leimaamiseen.
Immunofluoresenssi tai solukuvaus on tekniikka, jota käytetään spesifisen kohdeantigeenin leimaamiseen fluoroforilla. Tässä fluorofori on fluoresoiva kemiallinen yhdiste, joka voi säteillä uudelleen valoa valon virityksessä. Kun fluorofori sitoutuu kohdeantigeeniin, se mahdollistaa kohdemolekyylin havaitsemisen näytteestä. Sen kuvaamiseksi tarkemmin, kun antigeeni sitoutuu spesifiseen vasta-aineeseen, se voidaan konjugoida fluoroforien kanssa. Näin ollen kohdeantigeenin läsnäolo näytteessä on helppo havaita fluoresenssimikroskoopilla tarkasteltaessa.
Lisäksi immunofluoresenssia on kahta tyyppiä; suora ja epäsuora immunofluoresenssi. Ero suoran ja epäsuoran immunofluoresenssin välillä on pääasiassa käytettyjen vasta-aineiden lukumäärässä ja fluoroforikonjugaatiossa. Toisin sanoen suorassa immunofluoresenssissa fluorofori konjugoituu suoraan primaariseen vasta-aineeseen, kun taas epäsuorassa immunofluoresenssissa fluorofori konjugoituu sekundaarisen vasta-aineen kanssa.
Mikä on suora immunofluoresenssi?
Immunofluoresenssi käyttää vasta-aineita spesifisten kohdeantigeenien havaitsemiseen. Suora immunofluoresenssi on yksi kahdesta immunofluoresenssin tyypistä. Suorassa immunofluoresenssissa yksi vasta-aine (primaarinen vasta-aine) liittyy ja fluorofori konjugoituu suoraan primaarisen vasta-aineen kanssa. Kun vasta-aine sitoutuu kohdeantigeeniin, fluorofori emittoi fluoresenssia, joka voidaan havaita fluoresenssimikroskoopilla.
Kuva 01: Suora immunofluoresenssi
Suora immunofluoresenssi on kuitenkin kallis menetelmä, koska primaariset konjugoidut vasta-aineet ovat kalliita verrattuna sekundaarisiin vasta-aineisiin. Siitä huolimatta se ei sisällä lisävaihetta, joten se on lyhyempi tekniikka. Lisäksi epäspesifiset sitoutumiset vähenevät suorassa immunofluoresenssissa. Tästä syystä lajien ristireaktiivisuus on alhainen. Mutta havaitsemisessa suoran immunofluoresenssin herkkyys on heikko verrattuna epäsuoraan immunofluoresenssiin.
Mikä on epäsuora immunofluoresenssi?
Epäsuora immunofluoresenssi on toinen immunofluoresenssin tyyppi, joka sisältää kohdeantigeenin leimaamiseen kahdentyyppisiä vasta-aineita, kuten primäärisiä ja sekundaarisia vasta-aineita. Tässä menetelmässä fluorofori konjugoituu sekundaarisen vasta-aineen kanssa. Tästä syystä tämä tekniikka sisältää lisävaiheen.
Kuva 02: Immunofluoresenssi
Tässä menetelmässä herkkyys on kuitenkin korkea, koska useita fluoroforeja voidaan konjugoida sekundäärisiin vasta-aineisiin ja se helpottaa havaitsemista. Lisäksi epäsuora immunofluoresenssi on halvempaa johtuen siitä, että sekundääristen vasta-aineiden konjugointi on halvempaa ja helpompaa. Suoraan immunofluoresenssiin verrattuna lajien ristireaktiivisuus on korkea epäsuorassa menetelmässä.
Mitä yhtäläisyyksiä suoralla ja epäsuoralla immunofluoresenssilla on?
- Ne ovat kahdenlaisia immunofluoresenssitekniikoita.
- Primääriset vasta-aineet ja fluorofori liittyvät molempiin menetelmiin.
- Myös antigeeni-vasta-ainereaktio tapahtuu molemmissa menetelmissä.
- Lisäksi sekä suorassa että epäsuorassa immunofluoresenssissa käytetään fluoresenssimikroskooppia antigeenin havaitsemiseen.
Mitä eroa on suoralla ja epäsuoralla immunofluoresenssilla?
Immunofluoresenssi voi olla suoraa tai epäsuoraa perustuen fluoroforikonjugaatioon käytettyjen vasta-aineiden kanssa. Suorassa immunofluoresenssissa fluorofori konjugoituu primaarisen vasta-aineen kanssa, joka on yksittäinen vasta-aine, joka liittyy tähän tekniikkaan. Päinvastoin kuin epäsuorassa immunofluoresenssissa fluorofori konjugoituu sekundaarisen vasta-aineen kanssa, joka on yksi kahdesta tekniikkaan liittyvästä vasta-ainetyypistä. Siksi tärkein ero suoran ja epäsuoran immunofluoresenssin välillä on vasta-ainetyyppi, joka konjugoituu fluoroforin kanssa.
Seuraava infografiikka tarjoaa rinnakkaisen vertailun suoran ja epäsuoran immunofluoresenssin eroista.
Yhteenveto – suora vs. epäsuora immunofluoresenssi
Immunofluoresenssi on tekniikka, jota käytetään spesifisten antigeenien havaitsemiseen näytteestä. Tämä tekniikka käyttää spesifisiä vasta-aineita. Siksi tässä vasta-aineet konjugoituvat fluoroforien kanssa niiden havaitsemiseksi fluoresoivalla mikroskoopilla. Lisäksi on olemassa kahta tyyppiä immunofluoresenssia, nimittäin suora ja epäsuora immunofluoresenssi. Suora immunofluoresenssi sisältää yhden vasta-aineen ja fluoroforin, joka on suoraan konjugoitu tähän vasta-aineeseen. Epäsuora immunofluoresenssi sisältää kaksi vasta-ainetta; primaarinen ja sekundaarinen sekä fluorofori, joka on konjugoitu sekundaariseen vasta-aineeseen. Koska useat sekundaariset vasta-aineet voivat sitoutua primääriseen vasta-aineeseen ja useat fluoroforit voivat konjugoitua sekundaaristen vasta-aineiden kanssa, epäsuora immunofluoresenssi on herkempi menetelmä kuin suora menetelmä. Lisäksi epäsuora menetelmä on halvempi kuin suora menetelmä. Tämä on siis ero suoran ja epäsuoran immunofluoresenssin välillä.
