Avainero kilpailevan ja ei-kilpailevan ELISA:n välillä on se, että kilpaileva ELISA käyttää inhibitioantigeeniä, kun taas ei-kilpaileva ELISA ei käytä estoantigeenia määrityksessä.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) on immunologinen määritys, joka havaitsee erilaisia kohteita, kuten vasta-aineita, antigeenejä, proteiineja ja glykoproteiineja. Se on nopea ja yksinkertainen tapa suorittaa. Siksi sitä käytetään useammin tutkimus- ja diagnostisiin tarkoituksiin. ELISA sisältää entsyymien käytön sekä vasta-aineen ja antigeenin spesifisen sitoutumisen. Reaktioiden esiintymisen perusteella ELISA-menetelmiä on neljä: suora ELISA, epäsuora ELISA, kerros-ELISA ja esto-ELISA. Suora, epäsuora ja kerros-ELISA ovat ei-kilpailevia ELISA-tyyppejä, kun taas inhibitio-ELISA on eräänlainen täydellinen ELISA. Tämän artikkelin päätavoitteena on keskustella erosta kilpailevan ja ei-kilpailevan ELISA:n välillä.
Mikä on Competitive ELISA?
Kilpaileva ELISA mittaa näytteen antigeenipitoisuutta signaalihäiriöiden havaitsemisen avulla. Tässä määrityksessä käytetään inhibiittoriantigeeniä. Siksi se on eräänlainen esto-ELISA. Tämän menettelyn aikana näytteessä olevat antigeenit kilpailevat valitun vertailuantigeenin kanssa sitoutumisesta tiettyyn määrään leimattua vasta-ainetta. Lisäksi tämä menettely alkaa näytteen inkuboinnilla leimatun vasta-aineen ylimäärän kanssa. Vertailuantigeeni tulisi myös esipinnoittaa monikuoppaiselle määrityslevylle. Sitten näyteseos tulee lisätä määrityslevylle, joka sisältää vertailuantigeenin. Vapaat vasta-aineet sitoutuvat vertailuantigeeniin näytteessä olevan antigeenin määrästä riippuen. Näin ollen, jos näyteantigeeniä on enemmän, vertailuantigeenia havaitaan vähemmän. Siten se luo heikomman signaalin.
Kuva 01: ELISA
Päinvastoin, kun näyte sisältää vähemmän antigeeniä, enemmän ja enemmän vertailuantigeenia varaa vasta-aineet ja antaa vahvan signaalin. Koska kilpaileva ELISA antaa vahvemman signaalin, kun näyte sisältää pienen määrän antigeenejä, kilpaileva ELISA on erittäin herkkä määritys jopa näytteille, joissa on pieni määrä antigeenejä.
Joissakin kilpailevissa ELISA-sarjoissa leimattua antigeeniä käytetään leimatun vasta-aineen sijasta. Tässä leimattu antigeeni ja näyteantigeeni kilpailevat sitoutumisesta ensisijaiseen vasta-aineeseen. Vastaavasti, kun antigeenin määrä näytteessä on pieni, vasta-aineisiin sitoutuvan leimatun antigeenin määrä on suurempi ja luo vahvemman signaalin.
Mikä on ei-kilpailullinen ELISA?
Neljän ELISA-tyypin joukossa kolme tyyppiä on ei-kilpaileva ELISA. Ne ovat suora ELISA, epäsuora ELISA ja kerros-ELISA. Kaikki kolme formaattia toimivat yhteisen ELISA-periaatteen mukaisesti, mutta niiden menetelmissä on pieniä eroja.
Suora ELISA käyttää entsyymileimattua primaarista vasta-ainetta. Siksi se ei vaadi sekundaarista vasta-ainetta. Siksi suora ELISA on nopeampi kuin muut ELISA-menetelmät. Primaarinen vasta-aine sitoutuu suoraan immobilisoituun kohdeantigeeniin, joka on läsnä levyllä. Siten entsyymi-substraattireaktio tapahtuu, mikä tuottaa näkyvän signaalin.
Kuva 02: Sandwich ELISA
Toisin kuin suora ELISA, epäsuora ELISA käyttää leimaamatonta primaarista vasta-ainetta ja entsyymileimattua sekundaarista vasta-ainetta. Kun primaarinen vasta-aine sitoutuu immobilisoituun antigeeniin, sekundäärinen vasta-aine sitoutuu primääriseen vasta-aineeseen. Sekundaarisen vasta-aineen entsyymi reagoi antigeenin kanssa ja tuottaa näkyvän signaalin. Sandwich ELISA eroaa sekä suorasta että epäsuorasta ELISAsta. Tässä vasta-aine immobilisoidaan määrityslevyn seinämään.
Mitä yhtäläisyyksiä on kilpailevan ja ei-kilpailevan ELISA:n välillä?
- Kilpaileva ja ei-kilpaileva ELISA ovat kahdenlaisia immunosorbenttimääritystekniikoita.
- Ne ovat erittäin joustavia ja herkkiä tekniikoita.
- Lisäksi sekä kilpaileva että ei-kilpaileva ELISA ovat entsyymi-immunologisia määrityksiä.
- Myös molemmat menetelmät tuottavat signaalin entsyymi-substraattireaktiosta.
Mitä eroa on kilpailevan ja ei-kilpailevan ELISA:n välillä?
Kilpaileva ELISA on ELISA-testi, joka perustuu analyyttiantigeenin ja leimatun antigeenin väliseen lopputulokseen rajoitetun määrän spesifisen vasta-aineen os alta. Toisa alta sellaista kilpailua ei ole kiinnostavan antigeenin ja vertailuantigeenin välillä ei-kilpailevassa ELISA:ssa. Näin ollen tämä on avainero kilpailukykyisen ja ei-kilpailevan ELISA:n välillä. Samoin kilpaileva ELISA on esto-ELISA, kun taas ei-kilpaileva ELISA ei ole esto-ELISA. Tämä on siis myös ero kilpailevan ja ei-kilpailevan ELISA:n välillä.
Lisäksi kilpaileva ELISA soveltuu paremmin pienen määrän kiinnostavaa antigeeniä mittaamiseen. Se on herkkä menetelmä. Toisa alta ei-kilpaileva ELISA ei riipu näytteessä olevien antigeenien lukumäärästä. Siksi tämä on myös ero kilpailevan ja ei-kilpailevan ELISA:n välillä.
Alla infografiikka selittää eron kilpailevan ja ei-kilpailevan ELISA:n välillä.
Yhteenveto – Kilpaileva vs. ei-kilpaileva ELISA
Kilpaileva ja ei-kilpaileva ELISA ovat ELISA- tai entsyymi-immunosorbenttimääritysten kaksi päätyyppiä. Yhteenvetona kilpailevan ja ei-kilpailevan ELISA:n erosta, kilpaileva ELISA perustuu kilpailuun kiinnostavan antigeenin ja vertailuantigeenin välillä rajoitettua määrää vasta-aineita vastaan. Siksi kilpailevaa ELISAa kutsutaan myös esto-ELISAksi. Toisa alta ei-kilpaileva ELISA ei ole riippuvainen kohdeantigeenien ja vertailuantigeenien välisestä kilpailusta. Se käyttää ylimäärää leimattua spesifistä vasta-ainetta kiinnostavaa analyyttiä kohtaan. Näin ollen tämä on avainero kilpailukykyisen ja ei-kilpailevan ELISA:n välillä. Suora ELISA, epäsuora ELISA ja kerros-ELISA ovat ei-kilpailevan ELISAn kolme päätyyppiä.
