Avainero käänteisfaasi- ja normaalifaasi-HPLC:n välillä on se, että käänteisfaasi-HPLC käyttää ei-polaarista stationäärifaasia ja polaarista liikkuvaa faasia, kun taas normaalifaasi-HPLC käyttää polaarista stationäärifaasia ja vähemmän polaarista liikkuvaa vaihetta.
Normaalifaasi-HPLC on vanhin HPLC-tekniikka, jota Tswett käytti kasviuutteiden erottelussaan; hän käytti liitua lasipylväässä. Tämä oli klassinen kromatografian muoto, joka johti sen nimeämiseen "normaaliksi" tekniikaksi. Käänteisen faasin HPLC puolestaan on vastakohta normaalille tekniikalle, jonka tutkijat ovat kehittäneet viime aikoina.
Mikä on käänteisfaasi-HPLC?
Käänteisfaasi-HPLC on kromatografinen tekniikka, jossa käytämme hydrofobista stationaarifaasia. Kaikista HPLC-menetelmistä käytämme tätä menetelmää noin 70 % sen laajan sovellettavuuden ja toistettavuuden vuoksi. Kiinteä vaihe on ei-polaarinen ja liikkuva vaihe on polaarinen.
Useimmiten tiedemiehet käyttävät liikkuvana faasina vesipitoista veden seosta, jossa on sekoittuvaa, polaarista orgaanista liuotinta, kuten asetonitriiliä tai metanolia. Siksi analyytit ovat vuorovaikutuksessa ei-polaarisen stationaarifaasin kanssa.
Mikä on normaalivaiheen HPLC?
Normaalifaasi-HPLC on kromatografinen tekniikka, jossa käytämme hydrofiilistä stationaarifaasia. Se on perinteinen HPLC-menetelmä, vaikka emme käytä sitä niin paljon. Kiinteä faasi on polaarinen ja liikkuva faasi ei-polaarinen. Vielä tärkeämpää on, että tämän tekniikan liikkuva faasi on 100 % orgaaninen. Se tarkoittaa, että vettä ei käytetä tähän.
Kuva 01: Näyteprofiili normaalifaasi- ja käänteisfaasi-HPLC-kromatogrammeille analyytin komponenttien napaisuuden mukaan.
Tyypillisesti paikallaan pysyvä faasi sisältää piidioksidia, syaania, diolia, amino-sidottuja faaseja jne. Liikkuvia faaseja ovat orgaaniset liuottimet, kuten heksaani, etyyliasetaatti jne. Tämä tekniikka perustuu liuotin- tai analyyttimolekyylien pidättymiseen polaarinen stationaarinen vaihe.
Mitä eroa on käänteisvaiheen ja normaalivaiheen HPLC:n välillä?
Käänteisfaasi-HPLC on kromatografinen tekniikka, jossa käytämme hydrofobista stationaarifaasia. Tämän tekniikan stationäärinen vaihe on ei-polaarinen, kun taas liikkuva vaihe on polaarinen. Lisäksi tiedemiehet käyttävät käänteisfaasi-HPLC:ssä liikkuvana faasina vesipitoista veden seosta sekoittuvan, polaarisen orgaanisen liuottimen, kuten asetonitriilin tai metanolin, kanssa. Sitä vastoin normaalifaasi-HPLC on kromatografinen tekniikka, jossa käytämme hydrofiilistä stationaarifaasia. Tämän tekniikan stationäärinen vaihe on polaarinen, kun taas liikkuva vaihe on ei-polaarinen. Tämän lisäksi tutkijat käyttävät orgaanisia liuottimia, kuten heksaania, etyyliasetaattia jne. normaalifaasi-HPLC:n liikkuvana faasina. Alla oleva infografiikka esittää eron käänteisfaasi- ja normaalifaasi-HPLC:n välillä taulukkomuodossa.
Yhteenveto – Käänteinen vaihe vs. normaalivaihe HPLC
Käänteisfaasi- ja normaalifaasi-HPLC-tekniikat ovat kaksi nestekromatografiatekniikkaa. Keskeinen ero käänteisfaasi- ja normaalifaasi-HPLC:n välillä on se, että käänteisfaasi-HPLC käyttää ei-polaarista stationaarifaasia ja polaarista liikkuvaa vaihetta, kun taas normaalifaasi-HPLC käyttää polaarista stationaarifaasia ja vähemmän polaarista liikkuvaa vaihetta.
