Avainero HPLC:n ja UPLC:n välillä on, että HPLC mahdollistaa noin 5 mikrometrin kokoisten hiukkasten analysoinnin, kun taas UPLC mahdollistaa paljon pienempien, noin 2 mikrometrin hiukkasten analysoinnin.
HPLC ja UPLC ovat molemmat nestekromatografisia tekniikoita, jotka ovat hyödyllisiä yhdisteen komponenttien erottamisessa. Jotta tiedämme eron HPLC:n ja UPLC:n välillä, meidän on ensin tiedettävä, mikä HPLC on. Tämä johtuu siitä, että UPLC on HPLC:n erikoisversio ja ymmärrämme sen helposti, jos tiedämme, mikä HPLC on.
Mikä on HPLC?
Termi HPLC tarkoittaa korkean suorituskyvyn nestekromatografiaa. Se on tekniikka, jota voimme käyttää yhdisteen eri aineosien erottamiseen. Se on myös yleisimmin käytetty tekniikka seoksen komponenttien tunnistamiseen, kvantifiointiin ja erottamiseen. Lisäksi tämä tekniikka käyttää korkeaa painetta liuottimien työntämiseen kolonnin läpi. Lisäksi HPLC:n tärkeimmät sovellukset ovat biokemiassa yhdisteen ainesosien analysoinnissa. Se on ihanteellinen tapa erottaa ja tunnistaa aminohappoja, nukleiinihappoja, proteiineja, hiilivetyjä, torjunta-aineita, hiilihydraatteja, antibiootteja, steroideja ja lukemattomia muita epäorgaanisia aineita.
Kuva 01: HPLC-järjestelmä laboratoriossa
Lyhyesti sanottuna HPLC-tekniikan toimintatapa on seuraava. Ensinnäkin näyte tulisi viedä liikkuvan faasin virtaan erillisinä pieninä määrinä pumpun avulla. Pumpun paine on pidettävä 40 MPa:ssa. Sitten tämä liikkuvan faasin virta perkoloituu HPLC-kolonnin läpi. Myös näytteen komponentit kulkevat kolonnin läpi. Niiden liikkumisnopeudet ovat kuitenkin erilaisia. Tämä ero johtuu näytekomponenttien ja kolonnin sisällä olevan adsorbentin välisten vuorovaikutusten eroista. Kutsumme tätä adsorbenttia kiinteäksi faasiksi, koska se sijaitsee kolonnin sisällä (ei liiku). Toiseksi, kolonnin lopussa voimme kerätä näytteen, joka eluoituu kolonnista. Siellä voimme määrittää erot retentioajoissa jokaiselle näytteen komponentille.
Mikä on UPLC?
Termi UPLC tarkoittaa Ultra High-Performance Liquid Chromatography. Se on HPLC:n muunnelma, mutta toimintatapa on sama. Toisin kuin HPLC, tällä menetelmällä voidaan kuitenkin analysoida hyvin pieniä hiukkasia, kuten 2 mikrometrin pieniä hiukkasia.
Kuva 02: UPLC-laite
Lisäksi se tarjoaa nopeamman analyysin. Tässä tekniikassa käytämme 100 MPa:n pumppupainetta näytteen viemiseen kolonniin. Näin ollen tämä korkea paine vahvistaa, että koko näyte viedään kolonniin. Näin ollen tämä on erittäin tehokas verrattuna HPLC:hen.
Mitä eroa on HPLC:n ja UPLC:n välillä?
Termi HPLC tarkoittaa korkean suorituskyvyn nestekromatografiaa, kun taas termi UPLC tarkoittaa Ultra High Performance Liquid Chromatography. Siksi UPLC-tekniikka on HPLC:n kehitetty versio. Siten toimintatapa on sama molemmille tekniikoille. UPLC on kuitenkin tehokkaampi kuin HPLC, koska se käyttää korkeaa pumpun painetta; pumpun paine HPLC:lle on 40 MPa ja UPLC:lle 100 MPa. Siksi tämä on ero HPLC:n ja UPLC:n välillä. Ennen kaikkea tärkein ero HPLC:n ja UPLC:n välillä on se, että HPLC mahdollistaa noin 5 mikrometrin kokoisten hiukkasten analysoinnin, kun taas UPLC mahdollistaa paljon pienempien, noin 2 mikrometrin hiukkasten analysoinnin.
Yhteenveto – HPLC vs UPLC
UPLC on eräs HPLC:n muoto. Toimintatavat ovat siis samat. Mutta voimme löytää joitain parannettuja ominaisuuksia UPLC:stä verrattuna HPLC:hen. Siksi HPLC:n ja UPLC:n välillä on jonkin verran eroa. Tärkein ero HPLC:n ja UPLC:n välillä on kuitenkin se, että HPLC mahdollistaa noin 5 mikrometrin kokoisten hiukkasten analysoinnin, kun taas UPLC mahdollistaa paljon pienempien, noin 2 mikrometrin hiukkasten analysoinnin.
