Avainero RP HPLC:n ja HIC:n välillä on, että RP HPLC käyttää polaarisempaa liikkuvaa vaihetta ja vähemmän polaarista kiinteää vaihetta. Sitä vastoin HIC käyttää hydrofobista stationaarifaasia, joka sallii hydrofobisten molekyylien kiinnittymisen siihen.
Kromatografia on analyyttinen tekniikka, joka auttaa erottamaan seoksen komponentteihinsa. Ensin meidän on liuotettava näyte erotettavaksi liuokseksi. Tätä liuos-aineseosta kutsutaan liikkuvaksi faasiksi. Sitten liikkuva faasi johdetaan toisen materiaalin läpi, jota kutsutaan stationaarifaasiksi. Stationaarifaasi määrää komponenttien erottelun. Erottaminen tapahtuu johtuen materiaalin jakautumisesta liikkuvan ja kiinteän faasin välillä.
Mikä on RP HPLC?
Termi RP HPLC tarkoittaa käänteisfaasin korkean suorituskyvyn nestekromatografiaa. Se sisältää seoksen komponenttien erottamisen hydrofobisuuden mukaan. Liikkuvan faasin hydrofobiset komponentit liittyvät kiinteässä faasissa oleviin immobilisoituihin hydrofobisiin ligandeihin, kun taas hydrofiiliset komponentit eluoituvat stationaarifaasin läpi kiinnittymättä stationaarifaasin pintaan.
Kuva 01: HPLC-laitteisto
Lisäksi tällä menetelmällä on parempi toistettavuus verrattuna muihin kromatografisiin tekniikoihin, ja sen käyttökelpoisuus on myös laaja. Siksi käytämme tätä menetelmää laboratorioissa yli 75 %:ssa kaikista HPLC-menetelmistä. Suurimman osan ajasta käytämme liikkuvana faasina vesipitoista vesiseosta, jossa on sekoittuvaa polaarista orgaanista liuotinta. Siten se varmistaa liuoksen hydrofobisten komponenttien kiinnittymisen stationaarifaasin pintaan.
Mikä on HIC?
Termi HIC tarkoittaa hydrofobista vuorovaikutuskromatografiaa. Se on eräänlainen käänteisfaasi-HPLC, ja tätä menetelmää käytetään pääasiassa suurten biomolekyylien, kuten proteiinien, erottamiseen. Tässä menetelmässä meidän on käytettävä vesipitoista väliainetta biomolekyylin näytteen valmistamiseksi. Tämä johtuu siitä, että orgaaniset liuottimet voivat aiheuttaa proteiinien denaturoitumista. Lisäksi tämä tekniikka käyttää vuorovaikutusta suurten molekyylien välillä paikallaan olevan faasin hieman hydrofobisen pinnan kanssa. Lisäksi meidän on käytettävä näytteessä suurta suolapitoisuutta, koska se edistää proteiinin pysymistä pakkauksessa; tätä prosessia kutsutaan ulossuolaamiseksi. Vähentämällä suolapitoisuutta asteittain voimme saada biomolekyylit eluoitumaan erikseen niiden hydrofobisuuden mukaan.
Yleensä tämä menetelmä käyttää olosuhteita, jotka ovat päinvastaisia kuin ioninvaihtokromatografia. Tässä tekniikassa meidän on ensin johdettava puskuriliuos kolonnin läpi, jotta vähennetään liuenneen aineen solvataatiota näytteessä. Se paljastaa proteiinin hydrofobiset alueet. Kuitenkin, kun molekyyli on hydrofobisempi, vähemmän suolaa tarvitaan edistämään sitoutumista. Tässä vähemmän hydrofobiset liuenneet aineet eluoituvat ensin ja suolapitoisuuden muutoksen mukaan hydrofobisemmat liuenneet aineet eluoituvat viimeisenä.
Mitä eroa on RP HPLC:n ja HIC:n välillä?
Kromatografia on analyyttinen tekniikka seoksen komponenttien erottamiseen. RP HPLC ja HIC ovat kaksi erikoistunutta kromatografiatekniikkaa. avainero RP HPLC:n ja HIC:n välillä on se, että RP HPLC käyttää polaarisempaa liikkuvaa faasia ja vähemmän polaarista stationaarifaasia, kun taas HIC käyttää hydrofobista stationaarifaasia, joka sallii hydrofobisten molekyylien kiinnittymisen siihen.
Alla olevassa infografiikassa on yhteenveto RP HPLC:n ja HIC:n välillä.
Yhteenveto – RP HPLC vs. HIC
Kromatografia on analyyttinen tekniikka seoksen komponenttien erottamiseen. RP HPLC ja HIC ovat kaksi erikoistunutta kromatografiatekniikkaa. Keskeinen ero RP HPLC:n ja HIC:n välillä on se, että RP HPLC käyttää polaarisempaa liikkuvaa faasia ja vähemmän polaarista stationaarifaasia, kun taas HIC käyttää hydrofobista stationaarifaasia, joka sallii hydrofobisten molekyylien kiinnittymisen siihen.
