Avainero HPLC:n ja nopean HPLC:n välillä on, että HPLC:ssä käyttämämme pumpun paine on noin 40 MPa, kun taas pumpun paine nopeassa HPLC:ssä on noin 3-5 MPa.
Yleisin tekniikka, jota käytämme seoksen komponenttien erottamiseen, on "nestekromatografia". Tämän tarkoituksen saavuttamiseksi on useita tekniikoita, joista HPLC on erittäin suosittu. HPLC on lyhenne sanoista High Performance Liquid Chromatography, joka tunnistaa, määrittää ja erottaa nesteseoksen komponentit nopeasti ja tehokkaasti. Fast HPLC on HPLC:n erityinen sovellus, joka on viime aikoina kiinnittänyt ratkaisujen tutkimiseen osallistuvien huomion.
Mikä on HPLC?
HPLC on korkean suorituskyvyn nestekromatografia. Se käyttää korkeaa painetta työntämään liuottimia niin, että ne kulkevat kolonnin läpi. Se on myös ihanteellinen tapa erottaa ja tutkia erilaisia yhdisteitä, kuten aminohappoja, nukleiinihappoja, hiilihydraatteja, steroideja, antibiootteja ja hiilivetyjä. HPLC:llä on monia etuja muihin seosten erotusmenetelmiin verrattuna, kuten korkeampi resoluutio ja nopeampi analyysi. Se poistaa uudelleenpakkauksen ja regeneroinnin tarpeen ja tarjoaa paremman parametrien hallinnan ja siten lisää erottelun tehokkuutta. Ihannetapauksessa HPLC sopii suuriin sovelluksiin, koska se voi erottaa hyvin pieniä hiukkasia ja mahdollistaa korkeiden paineiden käytön, mikä helpottaa liuottimien virtausta.
Kuva 01: HPLC-sarake
Lyhyesti sanottuna HPLC-tekniikan toimintatapa on seuraava. Ensin meidän pitäisi viedä näyte liikkuvan faasin virtaan erillisinä pieninä määrinä pumpun avulla. Pumpun paine on pidettävä 40 MPa:ssa. Tämä liikkuvan faasin virta tunkeutuu HPLC-kolonnin läpi. Sitten näytteen komponentit kulkevat myös kolonnin läpi. Niiden liikenopeudet eroavat kuitenkin toisistaan johtuen näytekomponenttien ja kolonnin sisällä olevan adsorbentin välisistä vuorovaikutuksista. Kutsumme tätä adsorbenttia kiinteäksi faasiksi, koska se sijaitsee kolonnin sisällä (ei liiku). Sitten kolonnin lopussa voimme kerätä näytteen, joka eluoituu kolonnista, jolloin voimme kerätä näytteen komponentit erikseen.
Mikä on nopea HPLC?
Schering Plow -tutkimuslaitoksen tutkijat kehittivät äskettäin nopean HPLC-tekniikan, joka on HPLC:n edistynyt versio, koska se mahdollistaa yhdisteiden entistä nopeamman erottamisen seoksesta. Tämä tekniikka, joka tunnetaan myös nimellä nopea HPLC, käyttää 2,7 um:n sulatetun ytimen piidioksidihiukkasia, jotka on valmistettu sulattamalla 0,5 um huokoista piidioksidia kiinteän piidioksidihiukkasen päälle. Nämä ainutlaatuisesti tehdyt hiukkaset tekevät erotuksesta erittäin nopean ja myös alhaisella vastapaineella kuin mitä käytämme HPLC:ssä.
Kuva 02: FPLC-laitteet
Nopealla HPLC:llä saadaan vertailukelpoisia tuloksia UPLC:n kanssa, mutta tutkijat katsovat, että tämä tekniikka on parempi, koska se ei vaadi kovin kalliita ultrakorkeapainelaitteita. Hienoa on, että nopea HPLC ei vaadi uusia laboratorioprotokollia.
Mitä eroa on HPLC:n ja nopean HPLC:n välillä?
HPLC on korkean suorituskyvyn nestekromatografia ja nopea HPLC on korkean suorituskyvyn nestekromatografian edistynyt muoto. Tärkein ero HPLC:n ja nopean HPLC:n välillä on, että HPLC:ssä käyttämämme pumpun paine on noin 40 MPa. Pumpun paine nopeassa HPLC:ssä on noin 3-5 MPa. Lisäksi voimme erottaa erilaisia yhdisteitä, kuten aminohappoja, nukleiinihappoja, hiilihydraatteja, steroideja, antibiootteja ja hiilivetyjä käyttämällä HPLC-tekniikkaa, kun taas nopeaa HPLC-tekniikkaa käytetään pääasiassa proteiinien erottamiseen.
Alla oleva infografiikka antaa lisätietoja HPLC:n ja nopean HPLC:n eroista.
Yhteenveto – HPLC vs. nopea HPLC
HPLC on nestekromatografiatekniikka, josta on tullut erittäin suosittu kaikkialla maailmassa. Fast HPLC on uusi versio HPLC:stä, Schering Plough Instituten tutkijat kehittivät tämän uuden tekniikan. Avainero HPLC:n ja nopean HPLC:n välillä on pumpun paineessa, jota käytämme erottamiseen. Tuo on; pumpun paine, jota käytämme HPLC:ssä, on noin 40 MPa. Mutta nopean HPLC:n pumpun paine on noin 3-5 MPa.
