Avainero – HPLC vs HPTLC
Avainero HPLC:n ja HPTLC:n välillä on, että HPLC mahdollistaa näytteen komponenttien kvantitatiivisen erottamisen, kun taas HPTLC ei salli komponenttien kvantitatiivista erottamista näytteessä.
Kromatografia on fysikaalinen erotusmenetelmä, jota käytetään seoksen komponenttien erottamiseen ja tunnistamiseen. Sekä HPLC että HPTLC ovat kromatografisia tekniikoita. HPLC on korkean suorituskyvyn nestekromatografia. HPTLC on korkean suorituskyvyn ohutkerroskromatografia.
Mikä on HPLC?
HPLC on korkean suorituskyvyn nestekromatografia. Se on analyyttinen tekniikka, jota käytetään seoksen komponenttien erottamiseen, tunnistamiseen ja kvantifiointiin. Tässä tekniikassa näyte liuotetaan sopivaan liuottimeen. Sitten liuotin näytteen kanssa johdetaan pumpun läpi tietyllä paineella. Pumppu on täytetty kiinteällä adsorboivalla materiaalilla. Silloin jotkut komponentit sitoutuvat voimakkaasti imukykyiseen materiaaliin, kun taas toiset komponentit sitoutuvat löyhästi. Tämä aiheuttaa sen, että komponenttien virtausnopeudet pumpun läpi vaihtelevat. Siksi komponentit voidaan erottaa helposti.
Kuva 01: HPLC-järjestelmä
Pumpun täyttävä adsorbenttimateriaali tunnetaan kiinteänä faasina. Liuotin, jossa on liuennut näyte, tunnetaan liikkuvana faasina. Tässä tekniikassa käytettyä pumppua kutsutaan kolonniksi. Kolonni on täytetty adsorboivalla materiaalilla, yleisimmin piidioksidihiukkasilla. Näiden hiukkasten koko voi vaihdella välillä 2-50 μm. Erotusprosessiin vaikuttavat liikkuvan faasin koostumus ja järjestelmän lämpötila. Stationaarifaasin ja näytteen komponentin väliset vuorovaikutukset voivat olla hydrofobisia vuorovaikutuksia, dipoli-dipolivuorovaikutuksia, ionisidoksia jne.
HPLC:n toimintapaine on huomattavasti korkeampi kuin perinteisen nestekromatografian. Se on noin 50-350 bar. Ero nestekromatografian ja HPLC:n välillä on, että nestekromatografiassa näyte putoaa kolonnin läpi painovoiman vaikutuksesta, kun taas HPLC:ssä näyte paineistetaan kolonnin läpi. Kolonnin koko ja imukykyiset hiukkaset ovat myös hyvin pieniä verrattuna perinteiseen nestekromatografiaan. HPLC-tekniikan antama resoluutio on kuitenkin ylivoimainen.
Mikä on HPTLC?
HPTLC on korkean suorituskyvyn ohutkerroskromatografia. Se on perinteisen TLC:n edistynyt ja automatisoitu muoto. Tämä tekniikka tarjoaa tehokkaan ratkaisun lyhyessä ajassa. Tässä analyysimenetelmässä näyte ja referenssi voidaan analysoida samanaikaisesti, jolloin näytettä voidaan verrata referenssiin. Se antaa paremman analyyttisen tarkkuuden kuin muut kromatografiset tekniikat. Analyysin tekemiseen kuluu vähemmän aikaa. Tekniikka on edullinen tekniikka.
Kuva 02: Elintarvikevärien analyysi HPTLC:llä
HPTLC-menetelmä on yksinkertainen prosessi, ja näytteen valmistusvaihe on myös eliminoitu (perinteisessä TLC:ssä näytteen valmisteluvaihe sisältyy ennen erotusta. Tämä vaihe sisältää puhdistuksen ja rikastamisen). Liuotinta voidaan käyttää suoraan ilman esikäsittelyä, vaikka muut kromatografiset tekniikat vaativat esikäsittelyjä, kuten kaasunpoiston, suodatuksen jne.
HPTLC:ssä käytetty adsorbenttimateriaali on piidioksidia, jonka hiukkaskoot ovat hyvin pienet. Perinteisessä TLC:ssä piidioksidin hiukkaskoko on 5-20 μm, kun taas HPTLC:ssä se on 4-8 μm. Näyte levitetään HPTLC-levylle applikaattorilla. Se antaa yhtenäisen ja turvallisen sovelluksen. Sitten levyt asetetaan kammioon, jossa on liikkuva faasi. Kammion tulee olla kyllästetty liikkuvan faasin höyryllä. HPTLC-prosessin jälkeen voidaan havaita liikkuneet täplät. Kun HPTLC-tekniikka havaitsee täplät levyltä, käytetään sopivaa UV-aluetta tai jodikammiota.
Mitä eroa on HPLC:n ja HPTLC:n välillä?
HPLC vs HPTLC |
|
| HPLC on korkean suorituskyvyn nestekromatografia. | HPTLC on korkean suorituskyvyn ohutkerroskromatografia. |
| Tekniikka | |
| HPLC:ssä liikkuva faasi liuottimen kanssa johdetaan kiinteällä faasilla täytetyn kolonnin läpi. | HPTLC:ssä näyte täplätään TLC-levylle ja asetetaan kammioon, joka sisältää liikkuvan faasin; sitten näytteen annetaan kulkeutua ylöspäin levyä pitkin liikkuvan faasin mukana. |
| Mittaus | |
| HPLC:ssä komponenttien virtausnopeuksien eroja kolonnin läpi käytetään komponenttien erottamiseen näytteestä. | HPTLC:ssä näytteen kunkin komponentin kulkemien etäisyyksien eroja käytetään erottamaan näytteen komponentit. |
| Määrällinen erottelu | |
| HPLC mahdollistaa komponenttien kvantitatiivisen erottamisen näytteessä. | HPTLC ei salli näytteen komponenttien kvantitatiivista erottamista. |
Yhteenveto – HPLC vs HPTLC
HPLC ja HPTLC ovat kaksi kromatografiatekniikkaa. avainero HPLC:n ja HPTLC:n välillä on se, että HPLC mahdollistaa näytteen komponenttien kvantitatiivisen erottamisen, kun taas HPTLC ei salli komponenttien kvantitatiivista erottamista näytteessä.
