Avainero BL21:n ja DH5 Alphan välillä on, että BL21 on proteaasipuutteinen geneettisesti muokattu pätevä E. coli -solu, jota käytetään ensisijaisesti proteiinien ilmentämiseen, kun taas DH5 Alpha on geneettisesti muokattu pätevä E. coli -solu, jossa on ensisijaisesti recA1-mutaatio. plasmiditransformaatiota varten.
E. coli on yksi tunnetuimmista rekombinanttiproteiinituotannon organismeista. Siitä on tullut suosituin ilmaisualusta vuosien varrella. Sitä käytetään myös kennotehtaana. BL21 ja DH5 Alpha ovat kaksi geneettisesti muokattua E. coli -solua, joita tällä hetkellä käytetään proteiinien ilmentämiseen ja vastaavasti plasmiditransformaatioon.
Mikä on BL21?
BL21 on proteaasipuutteinen geneettisesti muokattu pätevä E. coli -solu, jota käytetään ensisijaisesti proteiinien ilmentämiseen. E. coli BL21 on bakteerisolu, joka on peräisin B-kannasta. Siinä on Lon-proteaasi- ja ompT-ulkokalvoproteaasivirheitä. Sitä käytetään yleisesti rekombinanttiproteiinin ilmentämiseen, koska se normaalisti tuo stabiiliutta ilmennetyille proteiineille. BL21 on käyttökelpoinen proteiinien ilmentämiseen pCold I-IV DNA:n ja pCold TF DNA:n kanssa. Mutta tätä pätevää E. coli -solua ei ole tarkoitettu proteiiniekspressiojärjestelmään, joka käyttää T7-promoottoria, kuten pET-järjestelmää. Syy tähän on se, että BL21 ei ekspressoi T7 RNA -polymeraasia. Lisäksi sitä ei suositella käytettäväksi plasmidin rakentamiseen tai valmistukseen, koska siinä ei ole recA-mutaatiota.
Kuva 01: BL21
Studier kuvasi BL21:n ensimmäisen kerran vuonna 1986 useiden B-linjan muutosten jälkeen. BL21-soluista puuttuu LON-proteaasi, joka hajottaa monia vieraita proteiineja. Lisäksi siitä puuttuu toinen geeni, joka koodaa ulkokalvon proteaasia (OmpT), jonka tehtävänä on hajottaa solunulkoisia proteiineja. Näiden proteiinien puute laukaisee vieraan proteiinin onnistuneen tuotannon E. coli BL21 -soluissa. Lisäksi hsdSB-mutaatio näissä soluissa estää vieraan DNA:n metylaation ja hajoamisen BL21-soluissa.
Mikä on DH5 Alpha?
DH5 Alpha on geneettisesti muokattu pätevä E. coli -solu, jossa on recA1-mutaatio ja jota käytetään ensisijaisesti plasmiditransformaatioon. Amerikkalainen biologi Douglas Hanahan on muuntanut DH5 Alpha E. coli -solut geneettisesti transformaation tehokkuuden maksimoimiseksi. DH5-alfasolussa on kolme erillistä mutaatiota: recA1, endA1 ja lacZAM15. recA1 on yksipistemutaatio, joka korvaa glysiini 160:n asparagiinihappotähteellä recA-polypeptidissä. Tämä mutaatio estää rekombinaasien aktiivisuuden ja inaktivoi homologisen rekombinaation. endA1-mutaatio inaktivoi solunsisäisen endonukleaasin, joka estää sitä hajottamasta insertoitua plasmidia.
Kuva 02: DH5 Alpha
Lisäksi lacZΔM15-mutaatio mahdollistaa transformoituneiden solujen sinivalkoisen seulonnan. Nämä solut ovat toimiv altaisia soluja. Niitä käytetään usein kalsiumkloriditransformaation kanssa halutun plasmidin lisäämiseksi. Tuoreen tutkimuksen mukaan DH5 Alpha -solu Hanahan-menetelmällä oli tehokkain pätevä solu plasmiditransformaatioon.
Mitä yhtäläisyyksiä on BL21:n ja DH5 Alphan välillä?
- BL21 ja DH5 Alpha ovat kaksi geneettisesti muokattua E.coli
- Molemmat ovat päteviä soluja.
- Ne koostuvat erillisistä mutaatioista.
- Molemmilla ei ole luonnollista elinympäristöä.
- Näitä käytetään laboratoriotarkoituksiin, kuten ilmentymistutkimuksiin ja kloonausmenetelmiin.
Mitä eroa on BL21:n ja DH5 Alphan välillä?
BL21 on proteaasipuutteinen geneettisesti muokattu pätevä E. coli -solu, jota käytetään ensisijaisesti proteiinien ilmentämiseen. Toisa alta DH5 Alpha on geneettisesti muokattu pätevä E. coli -solu, jossa on recA1-mutaatio, jota käytetään ensisijaisesti plasmiditransformaatioon. Joten tämä on avainero BL21:n ja DH5 Alphan välillä. Lisäksi BL21 E. coli -solussa ei ole recA1-mutaatiota, kun taas DH5 Alpha E. coli -solussa on recA1-mutaatio.
Seuraava infografiikka luettelee BL21:n ja DH5 Alphan väliset erot taulukkomuodossa.
Yhteenveto – BL21 vs DH5 Alpha
Tutkijat ovat kehittäneet geneettisesti ei-patogeeniset E. coli -kannat laboratorioekspressiotutkimuksia ja kloonaustarkoituksiin. BL21 ja DH5 Alpha ovat kaksi geneettisesti muokattua E. coli -solua. BL21:tä käytetään ensisijaisesti proteiinien ilmentymistutkimuksiin. Toisa alta DH5 Alfaa käytetään ensisijaisesti plasmidin transformaatiotarkoituksiin. Näin ollen tämä on yhteenveto BL21:n ja DH5 Alphan välisestä erosta.
