Avainero – YAC vs M13 Phage Vector
DNA:n kloonaus on tärkeä prosessi, joka mahdollistaa organismien tärkeiden DNA-fragmenttien lisääntymisen. Se vaatii spesifisen DNA:n liittämistä vektori-DNA:han yhdistelmä-DNA:n luomiseksi, joka muuttuu isäntäorganismiksi. Vektori on DNA-molekyyli, joka toimii vehikkelinä kuljettaakseen vierasta geneettistä materiaalia toiseen soluun tai organismiin. Sen pitäisi kyetä replikoitumaan isäntäorganismin sisällä ja tuottamaan useita kopioita yhdistelmä-DNA:sta. DNA-kloonauksessa käytetään erilaisia vektoreita. Hiivan keinotekoinen kromosomi (YAC) ja M13-faagivektori ovat kahta tyyppiä niiden joukossa.avainero YAC- ja M13-faagivektorin välillä on se, että YAC on keinotekoinen kromosomi, joka replikoituu hiivasoluissa, kun taas M13-faagivektori on yksijuosteinen pyöreä bakteriofagin M13 DNA, joka replikoituu E Coli -soluissa.
Mikä on YAC-vektori?
YAC on keinotekoisesti rakennettu kromosomi, jolla on kyky kuljettaa suurta osaa vieraasta DNA:sta ja replikoitua hiivasoluissa. Siinä on sentromeeriä, telomeeria ja itsenäisesti replikoituvia sekvenssejä, jotka ovat välttämättömiä replikaatiolle ja stabiiliudelle. YAC:ssa tulisi myös olla selektiivinen markkeri tai -markkerit ja restriktiokohdat, jotta se olisi tehokas kloonausvektori. Suuria sekvenssejä, jotka vaihtelevat 1000 kb:sta 2000 kb:iin, voidaan lisätä YAC:hen ja siirtää hiivaan.
Kuva 01: YAC Vector
Mikä on M13-faagivektori?
Bacteriophage M13 on virus, joka saastuttaa ja replikoituu E Colissa. M13-bakteriofagin genomi on kooltaan pieni, noin 6,7 kb. Se on yksijuosteinen, pyöreä ja positiivinen aisti-DNA. Tämä virus tartuttaa erityisesti E Coli -bakteerit F piluksen kautta. Kun se pääsee ssDNA:n sisään bakteeriin, se syntetisoi sen komplementaarisen juosteen ja muuttuu dsDNA:ksi tai M13:n replikatiiviseksi muodoksi (RF). RF voi käyttäytyä kuin plasmidi isäntäorganismissa. DsDNA replikoituu E Colissa ja tuottaa ssDNA:ta, jossa on uusia faageja. Nämä uudet faagit vapautuvat jatkuvasti E Colista tappamatta isäntäsolua. Infektio kuitenkin hidastaa E Colin kasvua. dsDNA voidaan uuttaa bakteerisoluista ja käyttää vektoreina DNA-kloonauksessa. Ne tunnetaan M13-faagivektoreina. Niitä voidaan helposti manipuloida ja käyttää samalla tavalla kuin plasmidivektoreita.
Näiden M13-faagien luontainen tartuntakyky toimii hyvänä pätevyytenä käytettäväksi vektorina geenikloonauksessa. Kun M13:a kehitetään vektoriksi, sen genomiin tulee sisällyttää useita elementtejä. Ne ovat lac-repressoriproteiinin (lac I) geeni, lac Z -geenin operaattori-proksimaalinen alue, lac-promoottori ja monikloonauskohta (polylinkkeri). Kun M13:n dsDNA:ta käytetään vektoreina, sitä voidaan käsitellä plasmidivektorina. ssDNA M13:n käytöllä on kuitenkin etuja DNA-sekvensoinnissa ja kohdennetussa mutageneesissä.
Koska M13-faagivektorissa on useita kloonauskohtia lacZ-alueella, rekombinoidut vektorit voidaan tunnistaa helposti sinivalkoisten pesäkkeiden seulonnalla IPTG:tä ja X-Gal:ia sisältävillä agarmaljoilla. Maljoille tuotetut siniset plakit eivät sisällä rekombinoituja faageja. Siksi faagit, joissa on inserttejä, voidaan valita kloonaustarkoitukseen.
Kuva 02: Bakteriofagi M13
Mitä eroa on YAC:n ja M13 Phage Vectorin välillä?
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| YAC on geneettisesti muokattu kromosomi, jolla on kyky kuljettaa suurta osaa vieraasta DNA:sta ja replikoitua hiivasoluissa. | M13-faagivektori on bakteriofagin M13 kehittämä virusvektori, jota käytetään vieraan DNA:n liittämiseen E Coliin. |
| Tarkoitus | |
| YAC:t suunniteltiin kloonaamaan suuria genomisen DNA:n fragmentteja hiivaan. | M13-faagivektoreita käytetään vieraan DNA:n liittämiseen E Coliin. |
| Lisää pituus | |
| YAC:t voivat sisältää megapohjan kokoisia genomisia inserttejä (1000 kb – 2000 kb). | Lisäkkeiden koko on noin 1 500 bps. |
| Rakennus | |
| YAC-DNA:ta on vaikea puhdistaa ehjänä, ja se vaatii korkean pitoisuuden YAC-vektorijärjestelmän muodostamiseksi. | Se tapahtuu syklisen fotosynteettisen elektroniketjun kautta. |
| Vakaus | |
| YAC on epävakaa. | M13-faagit voidaan erottaa helposti. |
| Koko | |
| Entsyymit ovat suurempia molekyylejä. | M13-faagit ovat stabiileja kuin YAC. |
Yhteenveto – YAC vs M13 Phage Vector
YAC on keinotekoisesti rakennettu vektorijärjestelmä, jossa käytetään tiettyä hiivan kromosomin aluetta suurten geneettisen materiaalin segmenttien lisäämiseksi hiivasoluihin. M13-faagivektori on vektorijärjestelmä, joka on johdettu bakteriofagi M13:sta, joka käyttää E colia isäntäorganismina. Tämä on tärkein ero YAC:n ja M13 Phage Vectorin välillä. Molemmat ovat yhtä hyödyllisiä yhdistelmä-DNA-tekniikassa ja geenikloonauksessa.
