Avainero – YAC vs BAC-vektorit
Vektoreita käytetään molekyylikloonauksessa. Vektori voidaan määritellä DNA-molekyyliksi, joka toimii vehikkelinä kuljettaakseen vierasta geneettistä materiaalia toiseen soluun. Vieraata DNA:ta sisältävä vektori tunnetaan rekombinantti-DNA:na, ja sen pitäisi kyetä replikoitumaan ja ilmentämään sitä isäntäorganismissa. Hiivan keinotekoinen kromosomi (YAC) ja bakteerin keinotekoinen kromosomi (BAC) ovat kahden tyyppisiä vektoreita, jotka osallistuvat kloonaukseen. avainero YAC:n ja BAC:n välillä on, että YAC on keinotekoisesti rakennettu vektorijärjestelmä, joka käyttää tiettyä hiivan kromosomin aluetta suurten geneettisten materiaalien segmenttien lisäämiseksi hiivasoluihin, kun taas BAC on keinotekoisesti rakennettu vektorijärjestelmä, joka käyttää tiettyä E.colin kromosomi lisätäkseen suuria DNA-segmenttejä E. coli -soluihin.
Mitä YAC-vektorit ovat?
YAC (Yeast keinotekoinen kromosomi) on keinotekoisesti rakennettu kromosomi, jolla on kyky kuljettaa suurta osaa vieraasta DNA:sta ja replikoitua hiivasoluissa. Siinä on sentromeeri, telomeerejä sekä itsenäisesti replikoituvia sekvenssejä, jotka ovat välttämättömiä replikaatiolle ja vakaudelle. YAC:ssa tulisi myös olla selektiivinen markkeri tai -markkerit ja restriktiokohdat, jotta se olisi tehokas kloonausvektori. Suuri sekvenssi, joka vaihtelee välillä 1000 kb - 2000 kb, voidaan lisätä YAC:hen ja siirtää hiivaan. YAC:n muunnostehokkuus on erittäin alhainen.
Kuva 01: YAC Vector
Mitä ovat BAC-vektorit?
Keinotekoinen bakteerikromosomi (BAC) on keinotekoisesti rakennettu kromosomi molekyylikloonausta varten. Siinä on spesifisiä alueita E. coli F -plasmidista ja se on pyöreä ja superkierretty. BAC on kehitetty kloonaamaan DNA-fragmentteja bakteereihin, erityisesti E. coliin. Se voi kantaa DNA-fragmentteja, joiden koko on jopa 300 kb. YAC:hen verrattuna BAC-kloonausinsertit ovat kooltaan pienempiä. BAC:t kehitettiin vuonna 1992 ja se on edelleen suosittu vakauden ja rakenteensa helppouden vuoksi. BAC:t ovat hyödyllisiä myös rokotteiden kehittämisessä.
Kuva 02: BAC-vektori molekyylikloonauksessa
Mitä eroa on YAC- ja BAC-vektorien välillä?
YAC vs BAC-vektorit |
|
| YAC on geneettisesti muokattu kromosomi, jossa on käytetty hiivan DNA:ta kloonaukseen. | BAC on geneettisesti muokattu DNA-molekyyli, jossa käytetään E. colin DNA:ta kloonaukseen. |
| Sukupuoli | |
| YAC:t suunniteltiin kloonaamaan suuria genomisen DNA:n fragmentteja hiivaan. | BAC:t kehitettiin suurten genomien fragmenttien kloonaamiseen Escherichia coliin. |
| Lisää pituus | |
| YAC:t voivat sisältää megapohjan kokoisia genomisia inserttejä. (1000 kb – 2000 kb). | BAC:t voivat sisältää 200–300 kt:n tai pienempiä lisäyksiä. |
| Rakennus | |
| YAC-DNA:ta on vaikea puhdistaa ehjänä ja vaatii suurta pitoisuutta YAC-vektorijärjestelmän muodostamiseksi. | BAC on helppo puhdistaa ehjänä ja se voidaan helposti rakentaa. |
| Kimerismi | |
| YAC:t ovat usein kimeerisiä. | BAC:t ovat harvoin kimeerisiä. |
| Vakaus | |
| YAC on epävakaa. | BAC on vakaa. |
| Muutokset | |
| Hiivan rekombinaatio on erittäin mahdollista ja pysyy aina aktiivisena. Siksi se voi luoda poistoja ja muita uudelleenjärjestelyjä YAC:ssa. | E. colin rekombinaatio estetään ja se kytketään päälle tarvittaessa. Näin ollen se vähentää ei-toivottuja uudelleenjärjestelyjä BAC:issa. |
| Huolto | |
| Yhdistelmä-YAC:iden manipulointi vaatii yleensä YAC:n siirtämistä E. coliin myöhempää käsittelyä varten. Siksi se on työläs prosessi. | BAC-modifikaatio tapahtuu suoraan E. colissa. DNA:n siirtoa ei siis tarvita. Siksi prosessi ei ole työläs. |
Yhteenveto – YAC vs BAC Vektorit
YAC:sta on tullut olennainen tutkimusväline kloonausprosesseissa, koska se pystyy kloonaamaan suuria DNA-fragmentteja isäntäorganismiin. YAC:illa on kuitenkin useita haittoja vektoreina, kuten rakennusvaikeudet, kimerismi, epävakaus jne. Tämän vuoksi tutkijat ovat kehittäneet BAC-vektoreita voittaakseen nämä ongelmat. BAC on konstruoitu käyttämällä E. colin kromosomin spesifisiä alueita. Se on vakaa vektori ja se voidaan helposti rakentaa. Kuitenkin DNA:n pituus, jonka BAC pystyy käsittelemään, on jopa 20 kertaa pienempi kuin YAC:n. Tämä on ero YAC- ja BAC-vektorijärjestelmien välillä. Nykyään BAC on suositumpi kuin YAC laboratorioissa.
