Avainero pBR322:n ja pUC19:n välillä on, että pBR322 on plasmidivektori, jonka pituus on 4361 emäsparia, kun taas pUC19 on plasmidivektori, jonka pituus on 2686 emäsparia.
Kloonausvektori on pieni pala DNA:ta, joka voidaan säilyttää organismissa vakaasti. Se on myös pieni pala DNA:ta, johon voidaan liittää vieras DNA-fragmentti kloonausta varten. Vektori sisältää tärkeitä ominaisuuksia, jotka mahdollistavat vieraan DNA-fragmentin kätevän liittämisen vektoreihin, kuten restriktiokohdat, selektiomarkkeri, reportterigeeni ja ekspressioelementti. Kloonaus suoritettiin ensin käyttämällä E.coli. E. colin kloonausvektorit sisältävät plasmidit, bakteriofagit, kosmidit ja bakteerin keinotekoiset kromosomit (BAC). Yleisimmin käytetyt vektorit ovat geneettisesti muokattuja plasmideja. pBR322 ja pUC19 ovat kahden tyyppisiä plasmidivektoreita.
Mikä on pBR322?
pBR322 on plasmidivektori. Se on yksi ensimmäisistä laaj alti käytetyistä E. colin kloonausvektoreista. Tämä vektori luotiin ensimmäisen kerran vuonna 1977 Herbert Boyerin laboratoriossa Kalifornian yliopistossa San Franciscossa. Se on pyöreä kaksijuosteinen DNA, jonka pituus on 4361 emäsparia.
Kuva 01: pBR322
Tällä plasmidivektorilla on erityispiirteitä. Normaalisti sillä on kaksi antibioottiresistenssigeeniä: ampisilliiniresistenssiä koodaava geeni bla (AmpR) ja tetrasykliiniresistenssiä koodaava geeni tetA (TetR) proteiinia. Lisäksi se sisältää pMB1:n replikaation aloituskohdan. Tässä plasmidivektorissa on myös rop-geeni, joka koodaa plasmidin kopioluvun restriktoria. Lisäksi tässä vektorissa on ainutlaatuiset restriktiokohdat yli 40 restriktioentsyymille. Yksitoista näistä neljästäkymmenestä restriktiokohdasta sijaitsee TetR geenissä. TetR -geenin promoottorissa on kaksi restriktiokohtaa restriktioentsyymeille HindIII ja Clal. Lisäksi AmpR-geenissä on kuusi erittäin tärkeää restriktiokohtaa. pBR322 on alhaisen kopioluvun kloonausvektori. Se tarjoaa noin 20 plasmidikopiota bakteerisolua kohti. Vektorin molekyylipaino on 2,83×106 d altonia.
Mikä on pUC19?
pUC19 on plasmidivektori, jonka pituus on 2686 emäsparia. Se on yksi Joachim Messingin ja työtovereiden luomista plasmidivektorien sarjasta. Tämän plasmidisarjan varhainen työ tehtiin Kalifornian yliopistossa. Se on pyöreä kaksijuosteinen DNA.
Kuva 02: pUC19
Tämä plasmidivektori sisältää myös tärkeitä ominaisuuksia. Siinä on β-glaktosidaasi (lacz) -geenin N-pään fragmentti. Sillä on myös usean kloonauskohdan (MCS) alue. Tämä alue on jaettu lacz-geenin kodoneihin 6 ja 7. MCS-alue tarjoaa monia restriktioendonukleaasirestriktiokohtia. β-glaktosidaasigeenin lisäksi pUC19 koodaa myös ampisilliiniresistenssigeeniä (AmpR). Lisäksi replikaation aloituskohta on peräisin plasmidista pMB1. Vaikka pUC19 on kooltaan pieni, sillä on korkea kopioluku (500-700 kopiota bakteerisolua kohti). Tämän plasmidivektorin molekyylipaino on 1,75×106 d altonia.
Mitä yhtäläisyyksiä pBR322:n ja pUC19:n välillä on?
- pBR322 ja pUC19 ovat kahden tyyppisiä plasmidivektoreita.
- Ne ovat suosittuja colin kloonausvektoreita.
- Molemmilla plasmidivektoreilla on sama plasmidin pMB1 replikaation aloituskohta.
- Näillä vektoreilla on useita rajoituskohtia.
- Molemmissa plasmidivektoreissa on ampisilliiniresistenssigeeni selektoitavana markkerina.
Mitä eroa on pBR322:lla ja pUC19:llä?
pBR322 on plasmidivektori, jonka pituus on 4361 emäsparia, kun taas pUC19 on plasmidivektori, jonka pituus on 2686 emäsparia. Siten tämä on avainero pBR322:n ja pUC19:n välillä. Lisäksi pBR322 on pienen kopioluvun plasmidivektori, kun taas pUC19 on suuren kopioluvun plasmidivektori.
Alla oleva infografiikka esittää pBR322:n ja pUC19:n väliset erot taulukkomuodossa vierekkäin vertailua varten.
Yhteenveto – pBR322 vs pUC19
E. colin yleisimmin käytetyt kloonausvektorit ovat geneettisesti muokattuja plasmideja.pBR322 ja pUC19 ovat kahden tyyppisiä plasmidivektoreita. pBR322 on plasmidivektori, jonka pituus on 4361 emäsparia, kun taas pUC19 on plasmidivektori, jonka pituus on 2686 emäsparia. Joten tämä on tärkein ero pBR322:n ja pUC19:n välillä.
