Avainero – nitroselluloosa vs nailonkalvo
Blottaus on tärkeä tekniikka spesifisten DNA-, RNA- ja proteiinisekvenssien havaitsemiseksi niiden seoksista molekyylibiologiassa. Se tehdään käyttämällä kalvoa nimeltä blot. On olemassa erilaisia blottaustekniikoita, kuten Northern, Southern ja Western blotting. Oikean kalvon valinta blottausprosessia varten tulee tehdä huolellisesti, jotta vältetään epäspesifinen sitoutuminen ja väärät havaitsemiset. Nitroselluloosa, nailon ja PVDF ovat yleisesti käytettyjä kalvoja blottaustekniikoissa. Niillä on erilaisia ominaisuuksia. avainero nitroselluloosan ja nailonkalvon välillä on, että nitroselluloosakalvoilla on korkea proteiinien immobilisaatiopotentiaali, kun taas nailonkalvoilla on korkea nukleiinihappoimmobilisaatiopotentiaali. Molempia kalvotyyppejä käytetään kuitenkin usein blottaustekniikoissa.
Mikä on nitroselluloosakalvo?
Nitroselluloosakalvo on yleisesti käytetty kalvosuodatin nukleiinihappo- ja proteiiniblottaustekniikoissa. Sillä on korkea proteiinisitoutumiskyky. Tästä syystä nitroselluloosakalvoja käytetään laaj alti Western blot -tekniikassa. Nitroselluloosakalvot ovat yhteensopivia kaikkien hybridisaatiotekniikoiden kanssa ja niillä on ylivoimainen sitoutumiskapasiteetti ilman häiriöitä. Nitroselluloosakalvot ovat luonnostaan hydrofiilisiä. Ne muodostavat hydrofiilisen vuorovaikutuksen molekyylien kanssa ja immobilisoivat ne tehokkaasti kalvolle. Kaupallisia nitroselluloosakalvoja on saatavana kahdessa huokoskoossa: 0,45 ja 0,2 µm.
Kuva 01: Western blottauksessa käytetty nitroselluloosakalvo
Mikä on nailonkalvo?
Nylonkalvo on toinen kaupallinen kalvo, jota käytetään blottaustekniikoissa. Sitä käytetään vaihtoehtoisesti nitroselluloosakalvojen kanssa Southern- ja Northern-blottaukseen. Nailonkalvot ovat ihanteellisia Southern-blottaukseen kuin nitroselluloosa, koska niillä on korkea affiniteetti sitoutua DNA:han. Useista nailonkalvojen ainutlaatuisista ominaisuuksista johtuen tutkijat käyttävät yleisesti nylonkalvoja Southern- ja Northern-blottaukseen nitroselluloosakalvon sijaan. Nylonkalvoja suositellaan myös kuorimiseen ja uudelleenkoettamiseen, toisin kuin nitroselluloosa.
Kuva 02: Southern-blottaukseen käytetty nailonkalvo
Mitä eroa on nitroselluloosalla ja nailonkalvolla?
Nitroselluloosa vs nailonkalvo |
|
| Nitroselluloosakalvot ovat hauraita. | Nylonkalvot ovat vähemmän hauraita. |
| Käsittely | |
| Niitä on vaikea käsitellä. | Ne ovat helppoja käsitellä. |
| Reprobing | |
| Tukemattomia nitroselluloosakalvoja on vaikea tutkia uudelleen. | Uudelleenkoetus on helppoa nylonkalvoilla. |
| Yhteensopivuus erilaisten säilytysolosuhteiden kanssa | |
| Nitroselluloosakalvoilla on vähemmän lujuutta kestämään erilaisia säilytysolosuhteita. | Nylonkalvot reagoivat vahvemmin erilaisiin säilytysolosuhteisiin. |
| Käytä | |
| Esikostutus vaaditaan. | Esikostutus ei vaadi nylonkalvoja. |
| Hydrofiilinen luonto | |
| Nitroselluloosakalvot ovat hydrofiilisiä, mutta vähemmän hydrofiilisiä kuin nailonkalvot. | Ne ovat luonteeltaan erittäin hydrofiilisiä. |
| Käytönestomahdollisuus | |
| Nitroselluloosakalvoilla on vähemmän affiniteettia nukleiinihappoihin. Mutta sillä on korkea affiniteetti proteiineihin. | Nylonkalvoilla on korkea sitoutumispotentiaali nukleiinihappoihin kuin nitroselluloosakalvoilla. |
Yhteenveto – nitroselluloosa vs nailonkalvo
Nitroselluloosa- ja nailonkalvot ovat erityisiä arkkeja, joita käytetään blottaustekniikassa geelin nauhakuvion toistamiseen. Ne mahdollistavat mahdollisuuden havaita tietty sekvenssi tai proteiini seoksista immobilisoimalla ne kalvolle. Kun molekyylit ovat immobilisoituneet kalvolle, sitä voidaan käyttää substraattina hybridisaatioanalyysissä leimattujen koettimien kanssa. Nitroselluloosakalvoa käytetään yleisesti proteiinien havaitsemiseen Western blot -tekniikassa, koska sillä on korkea sitoutumisaffiniteetti proteiineihin. Nailonkalvoja käytetään usein Southern- ja Northern-blottaukseen. Tämä on ero nitroselluloosan ja nailonkalvon välillä.
