Avainero – Immunofluoresenssi vs immunohistokemia
Molekyylibiologisia menetelmiä käyttävästä sairauksien diagnostiikasta on tullut kliinisen laboratoriotekniikan nouseva alue. Se sisältää kaikki testit ja menetelmät taudin tunnistamiseksi ja taudin syyn ymmärtämiseksi analysoimalla organismissa DNA:ta, RNA:ta tai ilmentyneitä proteiineja. Molekyylidiagnostiikan nopea kehitys on mahdollistanut tarttuvien ja ei-tarttuvien tautien perustutkimuksen. Näitä käytetään määrittämään muutoksia sekvenssissä tai ilmentymistasoissa keskeisissä geeneissä tai proteiineissa, jotka liittyvät sairauteen. Immunofluoresenssi (IF) ja immunohistokemia (IHC) ovat kaksi tällaista laaj alti käytettyä tekniikkaa syöpäbiologiassa. IF on eräänlainen IHC, jossa fluoresenssin havaitsemismenetelmää käytetään monoklonaalisten ja polyklonaalisten vasta-aineiden analysointiin, kun taas IHC käyttää kemiallisiin menetelmiin perustuvia menetelmiä monoklonaalisten ja polyklonaalisten vasta-aineiden havaitsemiseen. Tämä on tärkein ero IF:n ja IHC:n välillä.
Mikä on immunofluoresenssi (IF)?
Immunofluoresenssi on tunnistustekniikka, jossa määrityksessä käytetyt vasta-aineet leimataan käyttämällä fluoresoivia väriaineita tai fluoresoivia proteiineja havaitsemista varten. Leimatut sekundaariset vasta-aineet voivat aiheuttaa ei-toivottuja taustasignaaleja; siksi IF-tekniikka perustuu tällä hetkellä itse primaarisen vasta-aineen leimaamiseen ei-toivottujen signaalien välttämiseksi havaitsemisen aikana. Tämän tekniikan avulla estetään epäspesifinen sitoutuminen primaarisen ja sekundaarisen vasta-aineen välillä, ja se on nopeampaa, koska siihen ei liity sekundaarista inkubaatiovaihetta. Myös tietojen laatu on parantunut.
Kuva 01: Kaksinkertainen immunofluoresenssivärjäys BrdU:lle, NeuN:lle ja GFAP:lle
Fluorokromit tai fluoresoivat väriaineet ovat yhdisteitä, jotka voivat absorboida säteilyä, mieluiten ultraviolettisäteilyä, joka on virittynyt. Kun hiukkaset saavuttavat perustilaan virittyneestä tilasta, ne lähettävät säteilyä, joka vangitaan ja havaitaan detektorilla muodostaen spektrin. On erittäin tärkeää, että fluoresoiva leima on yhteensopiva ja stabiili tietylle reaktiolle, ja se tulisi konjugoida kunnolla vasta-aineeseen tarkkojen tulosten saamiseksi. Yksi eniten käytetyistä fluorokromeista on fluoreseiini-isotiosyanaatti (FITC), joka on väriltään vihreä ja jonka absorptio- ja emissiohuippuaallonpituudet ovat 490 nm ja 520 nm. Rodamiini, toinen IF:ssä käytetty aine, on väriltään punainen ja sillä on selkeät absorptio- ja emissiohuipun aallonpituudet 553 nm ja 627 nm.
Mikä on immunohistokemia (IHC)?
IHC on molekyylitestausmenetelmä, jota käytetään antigeenin tunnistamiseksi ja vahvistamiseksi kohdesolussa. Kohdesolu voi olla tarttuva hiukkanen, mikrobipatogeeni tai pahanlaatuinen kasvainsolu. IHC käyttää monoklonaalisia ja polyklonaalisia vasta-aineita määrittääkseen kohdesolujen pinnalla olevien antigeenien läsnäolon. Tekniikka perustuu antigeenin ja vasta-aineen sitoutumiseen. Näihin vasta-aineisiin konjugoidaan havaitsemismarkkeri tietyn antigeenin läsnäolon tai puuttumisen havaitsemiseksi. Nämä markkerit voivat olla kemiallisia markkereita, kuten entsyymejä, fluoresoivasti merkittyjä vasta-aineita tai radioleimattuja vasta-aineita.
Kuva 02: Immunohistokemialla värjätty hiiren aivoviipale
IHC:n suosituin sovellus on syöpäsolubiologiassa pahanlaatuisten kasvainten tunnistamiseen, mutta sitä käytetään myös tartuntatautien havaitsemiseen.
Mitä yhtäläisyyksiä immunofluoresenssin ja immunohistokemian välillä on?
- Immunofluoresenssi ja immunohistokemia tapahtuvat in vitro -olosuhteissa.
- Molemmat tekniikat perustuvat antigeenivasta-aineeseen
- Molemmat ovat erittäin nopeita tekniikoita.
- Tekniikkojen tulokset ovat toistettavissa.
- Molempien tietojen laatu on parantunut.
- Näitä tekniikoita käytetään syövän ja tartuntatautien diagnostiikassa.
Mitä eroa on immunofluoresenssin ja immunohistokemian välillä?
Immunofluoresenssi vs immunohistokemia |
|
| IF on havaitsemistekniikka, jossa määrityksessä käytetyt vasta-aineet leimataan käyttämällä fluoresoivia väriaineita tai fluoresoivia proteiineja havaitsemiseen. | IHC on havaitsemistekniikka, jossa määrityksessä käytetyt vasta-aineet leimataan käyttämällä kemikaaleja tai radioaktiivisia elementtejä havaitsemiseen. |
| Tarkkuus | |
| Tarkkuus on parempi IF-tekniikassa verrattuna IHC:hen. | Tarkkuus on pienempi IHC:ssä. |
| Spesifisyys | |
| JOS on tarkempi. | IHC on vähemmän tarkka. |
Yhteenveto – Immunofluoresenssi vs immunohistokemia
Molekulaariset mekanismit ovat tuoneet mukanaan monia muutoksia lääketieteen alalla, mikä on synnyttänyt edistyneitä molekyylitestausmenetelmiä, jotka ovat saaneet aikaan vallankumouksia diagnostiikan alalla. Nämä keksinnöt ovat johtaneet taudin nopeaan ja täsmälliseen tunnistamiseen ja vahvistamiseen, mikä mahdollistaa lääkkeiden onnistuneen antamisen ja tuotannon. Näitä tekniikoita käytetään myös farmakologiassa lääkkeiden kohteiden löytämiseksi ja lääkkeen farmakokineettisten ominaisuuksien vahvistamiseksi lääkeaineenvaihdunnan aikana. IF ja IHC ovat kaksi diagnostista menetelmää, jotka perustuvat antigeenin ja vasta-aineen sitoutumisen käsitteeseen, vaikka molempien tekniikoiden havaitsemistapa eroaa. IF käyttää fluoresenssin periaatetta antigeenin havaitsemiseen ja IHC käyttää kemiallisen konjugaation käsitettä antigeenin havaitsemiseen. Tämä on ero IF:n ja IHC:n välillä.
Lataa PDF-versio Immunofluoresenssi vs Immunohistokemia
Voit ladata tämän artikkelin PDF-version ja käyttää sitä offline-tarkoituksiin lainaushuomautuksen mukaisesti. Lataa PDF-versio tästä Ero immunofluoresenssin ja immunohistokemian välillä.
