Avainero – In situ -hybridisaatio vs. immunohistokemia
Syövän ja tartuntatautien diagnostiikka on suosittu trendi, jossa hyödynnetään uusia proteomiikkaan ja genomiikkaan perustuvia tekniikoita kasvainten tai tartuntasolujen, niiden lisääntymisen ja solujen kehityskohtien tunnistamiseen sekä tarttuvien ja tarttuvien sairauksien geneettisen perustan analysointiin. ei-tarttuvat taudit. Tämä johtaa lääkkeiden tarkkaan käsittelyyn ja suunnitteluun sekä räätälöityjen sairauksien hoitojen kehittämiseen. In situ -hybridisaatio (ISH) ja immunohistokemia (IHC) ovat kaksi tällaista laaj alti käytettyä tekniikkaa syöpäbiologiassa, ja avainero in situ -hybridisaation ja immunokemian välillä on molekyyleissä, joita käytetään analyysimenettelyssä. ISH:ssa nukleiinihappokoettimia käytetään analyyseissä, kun taas IHC:ssä monoklonaalisia ja polyklonaalisia vasta-aineita käytetään diagnostisiin määrityksiin.
Mikä on In Situ -hybridisaatio (ISH)?
In situ -hybridisaatio on nukleiinihappohybridisaatiotekniikka, joka suoritetaan suoraan kudoksen osalle tai osalle, koko kudokselle tai soluille. Tekniikka riippuu Watson Crickin komplementaarisen emäsparin teoriasta, mikä johtaa joko DNA-DNA-hybrideihin tai DNA-RNA-hybrideihin, jotka voivat havaita mutatoituneita geenejä tai tunnistaa vaaditun kiinnostavan geenin. Yksijuosteisia DNA-sekvenssejä, kaksijuosteisia DNA-sekvenssejä, yksijuosteisia RNA-sekvenssejä tai synteettisiä oligonukleotidisekvenssejä käytetään koettimina hybridisaatiotekniikan aikana, ja nämä koettimet leimataan radioaktiivisella fosforilla sen 5'-päässä tunnistustoimenpiteitä varten autoradiografiassa tai leimataan fluoresoivilla väreillä.. Käytettävissä on erilaisia ISH-tekniikoita käytetyn anturin tyypin ja noudatetun visualisointitekniikan tyypin mukaan.
Kuva 01: Fluoresoiva in situ -hybridisaatio
ISH:lla on monia sovelluksia, pääasiassa infektiotautien molekyylidiagnostiikassa taudinaiheuttajien tunnistamiseksi ja patogeenin vahvistamiseksi molekyylidiagnostiikan avulla. Sitä käytetään myös kehitysbiologian, karyotyypityksen ja fylogeneettisen analyysin sekä kromosomien fyysisen kartoituksen aloilla.
Mikä on immunohistokemia (IHC)?
IHC-tekniikassa tärkein analysoitava molekyyli on antigeeni. IHC:n aikana monoklonaalisia ja polyklonaalisia vasta-aineita käytetään määrittämään antigeenien läsnäolo infektion tai pahanlaatuisten solujen lisääntymistilanteen yhteydessä. Tekniikka perustuu antigeenin ja vasta-aineen sitoutumiseen, ja tähän tekniikkaan käytetään entsyymileimoja; yksi tällainen sovellus on ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay). Markkerit voivat olla myös fluoresoivia leimattuja vasta-aineita tai radioleimattuja vasta-aineita.
Kuva 02: Immunohistokemia
IHC:tä käytetään laaj alti syöpäsolujen havaitsemiseen. Diagnostiset toimenpiteet kohdistuvat kasvainsoluissa oleviin antigeeneihin kasvaimen tunnistamiseksi ja karakterisoimiseksi. Sama menettely on sisällytetty tartunnanaiheuttajien diagnosointiin. Monoklonaalisia ja polyklonaalisia vasta-aineita käytetään myös erilaisten geenituotteiden analysointiin mahdollistamalla vasta-aine-antigeenisitoutumisreaktio halutun proteiinin ja annetun synteettisen vasta-aineen välillä.
Mitä yhtäläisyyksiä in situ -hybridisaation ja immunohistokemian välillä on?
- ISH ja IHC ovat erittäin spesifisiä reaktioita.
- Molemmat tekniikat ovat erittäin tarkkoja.
- Molempia tekniikoita voidaan käyttää syövän ja tartuntatautien diagnostiikassa.
- Nämä tekniikat suoritetaan steriileissä in vitro -ympäristöissä.
- Molemmat ovat nopeita tekniikoita, jotka tuottavat toistettavia tuloksia.
- ISH ja IHC käyttävät havaitsemismenetelmiä, kuten radioleimausta ja fluoresenssitekniikoita.
Mitä eroa on in situ -hybridisaation ja immunohistokemian välillä?
In situ -hybridisaatio vs immunohistokemia |
|
| ISH on nukleiinihappohybridisaatiotekniikka, joka suoritetaan suoraan kudoksen osalle tai osalle tai koko kudokselle. | IHC on tekniikka, jossa monoklonaalisia ja polyklonaalisia vasta-aineita käytetään määrittämään antigeenien, jotka ovat solun pinnalle asetettuja erityisiä proteiinimarkkereita, läsnäolo. |
| Analysoitujen biomolekyylien tyyppi | |
| ISH analysoi nukleiinihappoja. | IHC analysoi proteiineja-antigeenejä. |
| Biokemiallisen reaktion perusteet | |
| Tässä tekniikassa tapahtuu täydentävää emäspariutumista DNA-DNA:n tai DNA-RNA:n välillä. | Antigeeni-vasta-ainevuorovaikutukset liittyvät immunohistokemiaan. |
| Entsyymiliitetyt tunnistusmenetelmät | |
| Entsyymiliitteisiä havaitsemismenetelmiä ei voi käyttää ISH:ssa. | Entsyymiliitteisiä havaitsemismenetelmiä voidaan käyttää IHC:ssä. |
Yhteenveto – In situ -hybridisaatio vs immunohistokemia
Molekyylidiagnostiikka on nopeita ja vahvistavia menetelmiä, joita voidaan käyttää tunnistamaan ei-tarttuva tauti, kuten syöpä tai tartuntatauti, kuten HIV tai tuberkuloosi, perustuen soluissa oleviin molekyylimarkkereihin, jotka johtavat taudin ilmenemiseen. Molekyylimarkkerit voivat olla läsnä ilmentyneiden proteiinien muodossa tai geneettisellä tasolla, jonka perusteella otetaan käyttöön erilaisia uusia tekniikoita tehokkuuden lisäämiseksi ja jotka ovat vähemmän työläitä, vaikka näihin tekniikoihin liittyy suuria kustannuksia. Siten ISH riippuu DNA-DNA- tai DNA-RNA-hybridin muodostumisesta, ja IHC riippuu vasta-aineen ja antigeenin välisistä spesifisistä reaktioista. Tämä on ero in situ -hybridisaation välillä.
Lataa PDF-versio in situ -hybridisaatiosta vs. immunohistokemiasta
Voit ladata tämän artikkelin PDF-version ja käyttää sitä offline-tarkoituksiin lainaushuomautuksen mukaisesti. Lataa PDF-versio tästä In situ -hybridisaation ja immunohistokemian ero.
