Avainero immunosaostuksen ja yhteissaostuksen välillä on se, että immunosaostus on tekniikka, joka saostaa proteiinin liuoksesta käyttämällä spesifistä vasta-ainetta, kun taas koimmunosaostus on tekniikka, joka saostaa ehjät proteiinikompleksit liuoksesta käyttämällä tiettyä vasta-ainetta.
Antigeeni-vasta-ainevuorovaikutus on spesifinen kemiallinen vuorovaikutus B-solujen tuottamien vasta-aineiden ja antigeenien (proteiinien) välillä immuunireaktion aikana. Normaalisti liukoiset antigeenit yhdistyvät liukoisten vasta-aineiden kanssa elektrolyytin läsnä ollessa liukoisessa lämpötilassa ja pH:ssa liukenemattoman näkyvän kompleksin muodostamiseksi. Tätä kutsutaan saostumisreaktioksi. Siksi immunosaostus ja yhteisimmunosaostus ovat kahden tyyppisiä saostusreaktioita, joita käytetään rutiininomaisesti laboratorioissa proteiinien, kuten antigeenien, tunnistamiseen.
Mikä on immuunisaostus?
Immunosaostus on tekniikka, jossa proteiini saostetaan liuoksesta käyttämällä tiettyä vasta-ainetta. Joskus tämä tekniikka tunnetaan myös yksilöllisen proteiinin immunosaostuksena. Immunosaostus käyttää vasta-ainetta valitun kiinnostavan proteiinin eristämiseen solulysaatista. Vasta-aine puhdistaa spesifisen kohdeproteiininsa tai -antigeeninsä seoksesta. Vasta-aine sitoutuu proteiiniin, ja vasta-aine-antigeenikompleksi vedetään ulos näytteestä. Kokeellisessa asetelmassa antigeeni-vasta-ainekompleksi vedetään ulos käyttämällä proteiini A/G-kytkettyä agaroosia tai magneettisia helmiä. Myöhemmin helmet pestään ja kiinnostava proteiini eluoidaan. Immunosaostuksella saatu puhdistettu proteiini tai antigeeni varmistetaan useilla eri tekniikoilla, kuten entsyymi-immunosorbenttimäärityksellä (ELISA) ja Western blotilla (WB).
Kuva 01: Immuunisaostus
Lisäksi eristetyt proteiinit tai antigeenit voidaan kvantifioida ja tunnistaa massaspektrometrialla käyttämällä primaarisekvenssiin perustuvia entsymaattisia pilkkoutumiskuvioita. Ennen immunosaostuskokeen aloittamista on otettava huomioon tietyt seikat: menetelmämuodon valinta, proteiinien ja helmien sitominen, oikean primaarisen vasta-aineen ja isotyypin valinta sekä negatiivinen kontrolli.
Mitä yhteisimmunosaostus on?
Koimmunosaostus on tekniikka ehjien proteiinikompleksien saostamiseksi liuoksesta käyttämällä spesifistä vasta-ainetta. Yhteisimmunosaostus toimii yleensä valitsemalla spesifinen vasta-aine, joka kohdistuu tunnettuun proteiiniin (antigeeniin), jonka uskotaan olevan suuremman proteiinikompleksin jäsen. Kohdistamalla tunnettu jäsen spesifisellä vasta-aineella on mahdollista vetää koko proteiinikompleksi ulos liuoksesta. Tämä mahdollistaa kompleksin tuntemattomien jäsenten tunnistamisen. Proteiinikompleksien vetämistä ulos liuoksesta kutsutaan joskus "pull-down"-mekanismiksi.
Kuva 02: B Communoprecipitation
Koimmunosaostus on tehokas tekniikka, jota käytetään proteiini-proteiinivuorovaikutusten analysointiin. Koimmunosaostuksen päätarkoitus on vuorovaikutuksessa olevien kumppanien, kuten ligandien, kofaktorien tai signaalimolekyylien tunnistaminen kiinnostavaan proteiiniin. Lisäksi yhteisimmunosaostus on tehokas tekniikka, jota käytetään proteiinien erottamiseen seerumista, solulysaatista, homogenoidusta kudoksesta tai käsitellystä väliaineesta.
Mitä yhtäläisyyksiä immuunisaostuksen ja yhteisimmunosaostuksen välillä on?
- Immunosaostus ja yhteisimmunosaostus ovat kahdenlaisia saostusreaktioihin perustuvia tekniikoita.
- Molempia tekniikoita voidaan käyttää kohdeantigeenin tunnistamiseen tietyn vasta-aineen avulla.
- Molemmat tekniikat riippuvat voimakkaasti antigeeni-vasta-ainevuorovaikutuksesta.
- Niitä käytetään rutiininomaisesti kliinisissä laboratorioissa.
Mitä eroa immuunisaostuksella ja yhteisimmunosaostuksella on?
Immunosaostus on tekniikka, joka saostaa proteiinin liuoksesta käyttämällä spesifistä vasta-ainetta, kun taas yhteisimmunosaostus on tekniikka, joka saostaa ehjät proteiinikompleksit liuoksesta käyttämällä spesifistä vasta-ainetta. Siten tämä on avainero immunosaostuksen ja koimmunosaostuksen välillä. Lisäksi immunosaostusta käytetään yleisemmin laboratorioissa, kun taas yhteisimmunosaostusta ei yleisesti käytetä laboratorioissa.
Alla oleva infografiikka esittelee immunosaostuksen ja koimmunosaostuksen väliset erot taulukkomuodossa rinnakkain vertailua varten.
Yhteenveto – Immuunisaostus vs. yhteisimmunosaostus
Immunosaostus ja yhteisimmunosaostus ovat kahden tyyppisiä saostusreaktioihin perustuvia tekniikoita, jotka riippuvat antigeeni-vasta-ainevuorovaikutuksesta. Immunosaostustekniikka saostaa proteiinin liuoksesta käyttämällä spesifistä vasta-ainetta, kun taas yhteis-immunosaostustekniikka saostaa ehjät proteiinikompleksit liuoksesta käyttämällä spesifistä vasta-ainetta. Tämä siis yhteenveto immunosaostuksen ja yhteisimmunosaostuksen välisestä erosta.
