Avainero GFP:n ja EGFP:n välillä on, että GFP on villin tyypin proteiini, joka sisältyy ei-nisäkässolujen molekyylikloonaukseen, kun taas EGFP on paranneltu tai muokattu GFP-tyyppi, jota voidaan käyttää nisäkässoluissa..
Molekylaarinen kloonaus on edistynyt tekniikka, jota tiedemiehet käyttävät v altavasti proteiinien ilmentämiseen rekombinanttitekniikan avulla. Yhdistelmä-DNA-tekniikassa on välttämätöntä transformoida rekombinanttivektori onnistuneesti isäntäorganismiin. Tästä syystä transformaatioprosessin aikana tulisi tunnistaa ja vahvistaa, onko kiinnostuksen kohteena oleva geeni transformoitunut isäntään vai ei. Tämän arvioimiseksi molekyylibiologit ottavat käyttöön useita tekniikoita. Näistä tekniikoista yksi on reportterigeeni. Nämä reportterigeenit toimivat valikoitavina markkereina oikeiden transformanttien valitsemiseksi. Siten Green Fluorescent Protein (GFP) ja Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) ovat kaksi molekyylikloonauksessa käytettyä reportteriproteiinia.
Mikä on GFP?
GFP on villityypin proteiini, joka sisältää 238 aminohappotähdettä ja useita valikoitavia aminohapposekvenssejä, jotka erottavat sen muista fluoresoivista proteiineista. Lisäksi tämä villityypin proteiini oli alun perin eristettynä Aequorea Victoriasta; eräänlainen meduusa. Luonnonilmiöissä meduusat pystyivät kuitenkin tuottamaan vihreää värifluoresenssia vasteena tiettyihin ärsykkeisiin.
Aiemmin tämä käsite yllätti tutkijat, ja he päättivät käyttää sitä yhdistelmä-DNA-tekniikoissaan. Tämän seurauksena tutkijat käyttivät tätä villityypin geenin mutanttimuotoa reportterigeeninä geeniekspressiotutkimuksissaan. GFP:n villityypin geeni pystyy tuottamaan proteiinia, joka antaa fluoresenssin huoneenlämpötilassa tai UV-valossa. Siksi transformantteihin liitettynä se ilmentää ja tuottaa fluoresenssia. Jos fluoresenssi syntyy transformaatioprosessin jälkeen, se vahvistaa transformaatioprosessin onnistumisen. Yksinkertaisesti sanottuna fluoresenssiemissio viestii kiinnostavan geenin kuljettavan vektorin onnistuneesta transformaatiosta isäntään.
Kuva 01: GFP
Tästä syystä GFP toimii geeniekspression in vivo -markkerina. Tällä hetkellä GFP:n tuottamiseen käytetään geenitekniikan tekniikoita. Saatavilla on myös monia parannettuja GFP-versioita, kuten EGFP. Näin ollen tämä mahdollistaa GFP:n tehokkaan käytön molekyylikloonaus- ja geeniekspressiotutkimuksissa.
Mikä on EGFP?
Enhanced Green Fluorescent Protein eli EGFP on GFP:n parannettu versio. Yksinkertaisesti sanottuna voimme määritellä EGFP:n villityypin GFP:n suunniteltuna versiona. Kun GFP:n villityypin geeni mutatoituu, se tuottaa hyödyllisiä vaikutuksia. Näin ollen GFP:n mutatoitunut geeni mahdollistaa uusien merkkien ilmentymisen, ja sen seurauksena voimme tuottaa paranneltua GFP:tä paremmilla ominaisuuksilla. Lisäksi voimme viedä mutaatioita onnistuneesti villityypin GFP-geeniin säteilytyksellä tai kemiallisilla menetelmillä. Nämä mutatoidut geenit tuottavat sitten EGFP:n, jolla on hyödyllisempiä ominaisuuksia.
Kuva 02: EGFP
EGFP:n parannetut ominaisuudet ovat seuraavat;
- Voi lähettää voimakkaampia fluoresenssisignaaleja.
- On korkea herkkyys.
- Voidaan käyttää nisäkässoluissa prokaryoottien ja muiden alemman tason eukaryoottien sijaan.
- Lisää myös tuotteen puhtautta.
Siksi GFP:hen verrattuna EGFP on suositeltu valinta geeniekspressiotutkimuksiin. Tuote on kuitenkin kalliimpi verrattuna GFP:hen.
Mitä yhtäläisyyksiä GFP:n ja EGFP:n välillä on?
- GFP ja EGFP ovat kaksi proteiinia, joilla on kyky lähettää vihreää väriä
- Siksi molemmat toimivat reportteriproteiineina geeniekspressiotutkimuksissa.
- Lisäksi on mahdollista syntetisoida molemmat yhdistelmä-DNA-tekniikalla.
- Lisäksi näitä kahta tyyppiä on helppo muuntaa edelleen parannettujen muotojen syntetisoimiseksi.
Mitä eroa GFP:llä ja EGFP:llä on?
Reportterigeeni on geeni, joka kiinnittyy yhdistelmä-DNA-tekniikassa kiinnostavan geenin kanssa. Se signaloi rekombinanttivektorin onnistuneesta transformaatiosta isäntään. Tässä GFP ja EGFP ovat kahden tyyppisiä vihreitä fluoresoivia proteiineja, jotka toimivat reportteriproteiineina. Tärkein ero GFP:n ja EGFP:n välillä on kuitenkin, että GFP on villityyppi, kun taas EGFP on GFP:n suunniteltu versio. Lisäksi EGFP:llä on hyödyllisempiä ominaisuuksia kuin GFP:llä. Esimerkiksi EGFP tuottaa vahvempaa loistevaloa ja on herkempi kuin GFP. Toinen ero GFP:n ja EGFP:n välillä on järjestelmät, joissa voimme käyttää näitä. Ei-nisäkäsjärjestelmät käyttävät GFP:tä, kun taas nisäkäsjärjestelmät käyttävät EGFP:tä.
Alla oleva infografiikka esittää eron GFP:n ja EGFP:n välillä taulukkomuodossa.
Yhteenveto – GFP vs EGFP
GFP ja EGFP ovat reportteriproteiineja molekyylikloonaus- ja geeniekspressiotutkimuksissa. GFP on villin tyypin proteiini, joka on vihreä fluoresoiva proteiini. Proteiini oli alun perin eristettynä meduusasta Aequorea victoria. Sitä vastoin EFGP on GFP-proteiinin tehostettu muoto. Se on villityypin mutantti, jolla on parannetut ominaisuudet. Tästä syystä EFGP:llä on suurempi signaalivoimakkuus ja suurempi herkkyys. Siksi voimme käyttää sitä nisäkäsvektoreissa. Sitä vastoin GFP:tä käytetään pääasiassa vain ei-nisäkäsvektoreissa. Kaiken kaikkiaan tämä on ero GFP:n ja EGFP:n välillä.
