Tärkein ero FPLC:ssä ja HPLC:ssä on, että FPLC on eräänlainen nestekromatografia, joka puhdistaa suuria biomolekyylejä, kuten proteiineja, nukleotideja ja peptidejä, kun taas HPLC on nestekromatografia, joka erottaa pienen molekyylipainon yhdisteet.
Nestekromatografia on tekniikka, jota käytetään näytteen erottamiseen sen yksittäisiin komponentteihin. Tämä erottuminen johtuu tiettyjen näytteiden vuorovaikutuksesta liikkuvien ja paikallaan olevien faasien kanssa. Näytteen komponentit erotetaan kunkin komponentin affiniteetin perusteella liikkuvaa faasia kohtaan nestekromatografiassa. Kun liikkuva faasi ja näyte kulkevat kolonnin läpi, näytteen komponentit alkavat erottua vyöhykkeiksi, jotka voidaan havaita UV-VIS-spektroskopialla. Siksi FPLC ja HPLC ovat kahdenlaisia nestekromatografiatekniikoita.
Mikä on FPLC?
FPLC on eräänlainen nestekromatografia, joka puhdistaa suuria biomolekyylejä, kuten proteiineja, nukleotideja ja peptidejä. Nopean proteiininestekromatografian (FPLC) kehitti ja markkinoi ensimmäisen kerran Ruotsissa Pharmacia-yhtiö vuonna 1982. Sitä käytetään usein proteiiniseosten analysointiin tai puhdistamiseen. Tämä tapahtuu periaatteella, jonka mukaan näytekomponenttien affiniteetit liikkuvat nestettä (liikkuva faasi) ja huokoinen kiinteä aine (stationaarifaasi). FPLC:ssä liikkuva faasi on puskuri ja kiinteä faasi on helmistä koostuva hartsi. Se koostuu yleensä silloitetusta agaroosista, joka on pakattu sylinterimäiseen lasi- tai muovikolonniin.
Kuva 01: FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography) -laite
Useimmissa FLPC-strategiassa käytetään ioninvaihtohartsia. Siksi mielenkiinnon kohteena oleva proteiini sitoutuu hartsiin varausvuorovaikutuksen kautta. FLPC-tekniikka käyttää myös kahta puskuria: puskuria 1 (ajopuskuri) ja puskuria 2 (eluointipuskuri). Aluksi, kun puskuria ja näytteen seosta ajetaan kolonnin läpi, seoksen kiinnostava proteiini sitoutuu hartsiin varausvuorovaikutuksen kautta. Mutta mielenkiinnon kohteena oleva proteiini dissosioituu ja palaa liuokseen eluointipuskurissa, kun eluointipuskuri kulkee kolonnin läpi prosessin lopussa. Myöhemmin liuos (eluentti, joka sisältää kiinnostavaa proteiinia) kulkee kahden detektorin läpi, jotka mittaavat suolapitoisuutta ja proteiinipitoisuutta. Kun jokainen proteiini eluoituu, se näkyy "huippuna" havaitsemisen aikana ja voidaan kerätä myöhempää käyttöä varten.
Mikä on HPLC?
HPLC on eräänlainen nestekromatografia, joka erottaa pienen molekyylipainon yhdisteet. Vuonna 1969 ensimmäisen HPLC:n kaupallisesti valmisti Waters Corporation, USA. Korkean suorituskyvyn nestekromatografiassa (HPLC) liuottimessa (liikkuva faasi) oleva näyteseos (analyytti) pumpataan kolonnin läpi, jossa on kromatografista pakkausmateriaalia (stationaarinen faasi) korkeassa paineessa. Näyteseosta kuljettaa liikkuva heliumin tai typen kantajakaasuvirta.
Kuva 02: HPLC (High-Performance Liquid Chromatography)
Näytettäseoksen komponentit, joilla on vähiten vuorovaikutusta kiinteän faasin kanssa tai eniten vuorovaikutusta liikkuvan faasin kanssa, poistuvat kolonnista nopeammin. Toisa alta näyteseoksen komponentit, joilla on eniten vuorovaikutusta kiinteän faasin kanssa tai vähiten vuorovaikutusta liikkuvan faasin kanssa, poistuvat kolonnista hitaammin. Yllä olevan vuorovaikutusperiaatteen perusteella näyteseoksen komponentit voidaan erottaa. Lisäksi instrumentin ilmaisin tunnistaa jokaisen kolonnista poistuvan näyteseoksen komponentin. HPLC:tä käytetään ympäristö- ja biologisten näytteiden tarkastamiseen tunnettujen yhdisteiden, kuten lääkkeiden, toksiinien tai torjunta-aineiden, esiintymisen tai puuttumisen var alta. Sitä käytetään eri teollisuudenaloilla, kuten lääketeollisuudessa, ympäristössä, oikeuslääketieteessä ja kemikaaleissa.
Mitä yhtäläisyyksiä on FPLC:n ja HPLC:n välillä?
- FPLC ja HPLC ovat nestekromatografian tyyppejä.
- Molempia käytetään biologisten näytteiden erottamiseen ja tunnistamiseen.
- Niissä on nestemäinen liikkuva faasi ja kiinteä kiinteä faasi.
- Molemmat tekniikat käyttävät saraketta kulkemaan näytteen läpi.
- Näissä tekniikoissa käytetään pumppuja, ilmaisimia, venttiileitä ja ohjelmistoja näytteen erottamiseen ja havaitsemiseen.
Mitä eroa on FPLC:n ja HPLC:n välillä?
FPLC on eräänlainen nestekromatografia, jota käytetään suurten biomolekyylien, kuten proteiinien, nukleotidien ja peptidien, puhdistamiseen. HPLC on eräänlainen nestekromatografia, jota käytetään pienen molekyylipainon yhdisteiden erottamiseen. Joten tämä on tärkein ero FPLC:n ja HPLC:n välillä. Lisäksi FPLC käyttää pH- ja johtavuusmittareita sekä kaivoja fraktionkeräilijöinä. Sitä vastoin HPLC ei käytä pH- ja johtavuusmonitoreja ja fraktionkerääjiä.
Alla olevassa infografiikassa luetellaan lisää eroja FPLC:n ja HPLC:n välillä taulukkomuodossa.
Yhteenveto – FPLC vs HPLC
Kromatografia on laboratorioanalyyttinen tekniikka, jota käytetään komponenttien erottamiseen seoksesta. Se on jaettu useisiin tyyppeihin, kuten pylväskromatografiaan, kaasukromatografiaan, nestekromatografiaan, ioninvaihtokromatografiaan jne. FPLC ja HPLC ovat kahden tyyppisiä nestekromatografiatekniikoita. FPLC on eräänlainen nestekromatografia, jota käytetään suurten biomolekyylien, kuten proteiinien, nukleotidien ja peptidien, puhdistamiseen. Toisa alta HPLC on eräänlainen nestekromatografia, jota käytetään pienen molekyylipainon yhdisteiden erottamiseen. Näin ollen tämä on yhteenveto siitä, mikä ero on FPLC:n ja HPLC:n välillä.
