Avainero – CFU vs MPN
Pysäkettä muodostava yksikkö (CFU) ja todennäköisin luku (MPN) ovat kaksi menetelmää, joita käytetään näytteissä olevien mikro-organismien laskemiseen. Molempia parametreja käytetään veden laadun ja ulosteen indikaattoribakteerien havaitsemiseen vesinäytteistä. Pesäkkeitä muodostava yksikkö on mitta, jota käytetään elävien bakteeri- tai sienisolujen lukumäärän laskemiseen tietyn näytteen tilavuudessa tai painossa. Tämän parametrin vakioyksikkö on CFU/ml tai CFU/g. Todennäköisin luku on toinen yksikkö, jota käytetään mittaamaan elävien bakteerisolujen lukumäärää nestenäytteessä. Keskeinen ero CFU:n ja MPN:n välillä on, että CFU lasketaan kiinteällä agarmaljalla kasvavista bakteeri- ja sienipesäkkeistä, kun taas MPN lasketaan nestemäisessä alustassa kasvavista elävistä bakteereista.
Mikä on CFU?
Pysäkettä muodostava yksikkö (CFU) on parametri, joka mittaa elävien bakteeri- tai sienisolujen lukumäärän tietyssä näytteessä. Menetelmää, joka laskee pesäkkeitä muodostavat yksiköt, kutsutaan standardilevymääräksi. Elävät pesäkkeet, jotka näkyvät agarmaljoilla, ilmaistaan CFU:na 1 ml:aa (pesäkkeitä muodostava yksikkö per millilitra) näytettä nesteille tai CFU per 1 g (pesäkettä muodostava yksikkö per gramma) näytettä kiinteiden aineiden os alta.
CFU:n mittaamiseen näytteestä käytetään kahta yleistä menetelmää. Ne ovat levityslevymenetelmää ja kaatolevymenetelmää. Näitä kahta menetelmää tukee sarjalaimennustekniikka. Sarjalaimennetut näytteet mahdollistavat laskettavan määrän pesäkkeitä saannin agarin pinnalle. Tunnettu määrä näytettä voidaan levittää agarmaljan pinnalle tai sekoittaa agarin kanssa ja kaataa levylle. Sitten levyä inkuboidaan ja muodostuneet pesäkkeet lasketaan. Pesäkkeiden lukumäärä liittyy alkuperäisen näytteen sisällä olevien mikro-organismien määrään. Levyt, joilla on liian monta pesäkettä tai liian vähän pesäkkeitä, jätetään laskennan ulkopuolelle, koska tulokset eivät ehkä ole tilastollisesti tarkkoja näillä levyillä. Tilastollisesti paras alue on 30–300 pesäkettä agarmaljalla. Siksi oikeat levyt tulee valita tarkkaa luettelointia varten. Sarjalaimennus suoritetaan yllä olevalle toiminnolle.
Kun lasket elävien pesäkkeiden määrän maljoilla, CFU/ml voidaan laskea käyttämällä seuraavaa yhtälöä.
CFU / ml alkuperäistä näytettä=pesäkkeiden lukumäärä levyllä X laimennuskerroin
Laimennuskerroin=(1/ levyn laimennus)
Esimerkiksi jos saat 149 pesäkettä 10-4-laimennoksen levylle, bakteerien lukumäärä 1 ml:ssa alkuperäistä näytettä voidaan laskea seuraavasti:
CFU/ml=(149) x (1/10-4)
=149 × 104 tai 1490000
=1. 49 x 106
Kuva 01: Pesäkkeitä muodostava yksikkö
Mikä MPN on?
Todennäköisin luku on vaihtoehto CFU/ml:lle. MPN arvioi myös eläviä soluja nestenäytteessä. Se laskee nesteviljelmässä kasvavia organismeja ja on pääasiassa bakteriologinen tekniikka. Tämä menetelmä on erityisen hyödyllinen näytteille, jotka sisältävät pieniä pitoisuuksia bakteerisoluja; esimerkiksi maito, juomavesi jne. MPN-arvo ilmaistaan 100 ml:lla tilavuutta. MPN luottaa todennäköisyysteoriaan perustuvaan tilastolliseen menetelmään. On olemassa tilastotaulukoita, jotka on suunniteltu MPN-arvojen löytämiseksi 100 ml näytettä kohti. Nämä taulukot näyttävät tulokset 95 %:n luottamusrajoilla.
MPN-arvo lasketaan moniputkifermentointimenetelmäksi kutsutun tekniikan suorittamisen jälkeen. Kolme putkisarjaa, jotka sisältävät sopivaa viljelyalustaa, siirrostetaan kolmella eri tilavuudella näytettä, kuten 10 ml, 1 ml ja 0 ml.1 ml ja inkuboidaan kasvua varten. Inkubaatiojakson jälkeen putkille pisteytetään + (positiivinen) tai – (negatiivinen) kasvun esiintymisen tai puuttumisen suhteen. Positiivisten ja negatiivisten tulosten mallia verrataan sitten tilastollisten todennäköisyyksien MPN-taulukkoon mikro-organismien lukumäärän arvioimiseksi. Sitten MPN-arvo annetaan 100 ml:lle näytettä. MPN:tä käytetään laaj alti vesinäytteissä olevien koliformisten bakteerien havaitsemiseen.
Kuva 02: MPN-taulukko
Mitä eroa on CFU:n ja MPN:n välillä?
CFU vs MPN |
|
| CFU on mitta, jota käytetään ilmaisemaan elävien bakteeri- tai sienipesäkkeiden lukumäärä tietyssä näytteessä. | MPN on vaihtoehtoinen mitta CFU:lle ja mittaa elävien bakteerisolujen määrää nestenäytteessä. |
| Yksikkö | |
| CFU/ml tai CFU/g | MPN/100 ml |
| Laskelma | |
| CFU lasketaan laskemalla agarmaljoilla kasvaneiden pesäkkeiden lukumäärä. | MPN lasketaan vertaamalla putkien positiivisia ja negatiivisia kuvioita MPN-tilastotaulukon kanssa. |
| Serial Dilution Technique | |
| Sarjalaimennus suoritetaan ennen näytteiden asettamista agarmaljoille. | Sarjalaimennusta ei tavallisesti suoriteta, kun MPN lasketaan |
| Menetelmät | |
| Levityslevymenetelmä ja kaatolevymenetelmä ovat kahdenlaisia menetelmiä CFU:n saamiseksi. | Moniputkifermentointi on menetelmä, jolla saadaan MPN-arvo. |
Yhteenveto – CFU vs MPN
Mikrobien kasvun mittaaminen on tarpeen monista syistä. Elintarviketeollisuudessa on tarpeen mitata elintarvikkeiden mikro-organismien taso ja tyyppi. Elintarviketeollisuudessa ja lääketieteessä on tarpeen varmistaa, että sterilointihoitoja sovelletaan tehokkaasti. Jätevedenpuhdistamoissa mikrobimäärä on tehtävä rutiininomaisesti. Molekyylibiologian menetelmää optimoitaessa on tarpeen mitata pesäkkeiden lukumäärä levyillä. Tästä syystä käytettävissä on erilaisia laskenta- ja kasvumittausmenetelmiä. CFU ja MPN ovat kaksi tällaista menetelmää, joita käytetään laajasti eri aloilla. CFU on tietyssä näytteessä olevien elävien bakteeri- ja sienipesäkkeiden lukumäärän mitta. Se lasketaan käyttämällä tavallista verihiutalelaskentamenetelmää tai elinkelpoisten verihiutaleiden laskentamenetelmää. MPN on toinen mitta, joka ilmaisee nestemäisen näytteen tietyssä tilavuudessa läsnä olevien bakteerisolujen lukumäärän. Se lasketaan käyttämällä usean putken käymismenetelmää ja MPN-taulukkoa. Tämä on ero CFU:n ja MPN:n välillä.
Lataa PDF-versio CFU vs MPN
Voit ladata tämän artikkelin PDF-version ja käyttää sitä offline-tarkoituksiin lainaushuomautuksen mukaisesti. Lataa PDF-versio tästä. Ero CFU:n ja MPN:n välillä.
