Avainero BCA- ja Bradford-määrityksen välillä on, että BCA-määritys on aikaa vievä ja vähemmän tarkka, kun taas Bradford-määritys on nopea ja tarkka.
BCA ja Bradford-määritys ovat kaksi määritysmenetelmää proteiinipitoisuuden määrittämiseksi. Näillä kahdella määrityksellä on erilaiset määritysperiaatteet ja erot niiden tarkkuudessa.
Mikä on BCA-määritys?
BCA-määritys tai bikinkoniinihappomääritys on biokemiallinen määritys, joka on hyödyllinen määritettäessä proteiinin kokonaispitoisuutta liuoksessa. Tämä menetelmä on myös nimetty Smith-määritykseksi sen keksijän Paul K. Smithin mukaan. Tämä analyyttinen menetelmä osoittaa yhtäläisyyksiä Lowryn proteiinimäärityksen, Bradfordin proteiinimäärityksen tai biureettireagenssin kanssa. Voimme tarkkailla proteiinin kokonaispitoisuutta tietyssä näytteessä näyteliuoksen värinmuutoksen kautta, joka muuttuu vihreästä purppuraiseksi. Tämä värinmuutos tapahtuu suhteessa proteiinipitoisuuteen. Sen jälkeen voimme käyttää kolorimetristä tekniikkaa analysoimaan näytteen värin intensiteettiä ja proteiinipitoisuutta.
BCA Proteiinin arviointimenetelmä
Kun otetaan huomioon BCA-määrityksen mekanismi, tyypillinen BCA-liuos sisältää erittäin emäksistä liuosta, jonka pH on lähes noin 11,25, ja tämän liuoksen ainesosia ovat bikinkoniinihappo, natriumkarbonaatti, natriumbikarbonaatti, natriumtartraatti ja kupari(II)sulfaattipentahydraatti. Tämä määritys riippuu ensisijaisesti kahdesta kemiallisesta reaktiosta: kuparin (II) pelkistämisestä kupariksi (I) proteiinissa olevien peptidisidosten vaikutuksesta ja kahden bikinkoniinihappomolekyylin kelatoitumisesta kupari(I)-ionin kanssa, mikä johtaa purppuranväriseen kompleksiin, joka voi absorboivat valoa aallonpituudella 562 nm. Ensimmäisessä reaktiossa peptidisidosten vähentämän kuparin (II) määrä on verrannollinen näytteessä olevan proteiinin määrään.
Mikä on Bradford Assay?
Bradford-määritys on spektroskooppinen analyyttinen menetelmä, joka on hyödyllinen liuoksen proteiinipitoisuuden mittaamisessa. Tämän menetelmän kehitti Marion M. Bradford vuonna 1976, ja se on suhteellisen nopea ja tarkka menetelmä.
Proteiinin ja Bradford-reagenssin värireaktio
Voimme käyttää tätä menetelmää näytteen proteiinipitoisuuden määrittämiseen. Näytteessä tämän määrityksen aikana tapahtuva kemiallinen reaktio riippuu yksinomaan näytteen proteiinin aminohappokoostumuksesta.
Bradfordin proteiinien arviointimenetelmä
Tämän määrityksen menetelmää tarkasteltaessa se on kolorimetrinen proteiinimääritys, joka perustuu Coomassie Brilliant Blue G-250 -nimisen väriaineen absorbanssisiirtymään. Yleensä tätä väriainetta on kolmessa muodossa: anioninen (sininen), neutraali (vihreä) ja kationinen (punainen). Siksi happamissa olosuhteissa väriaine muuttaa värinsä punaisesta siniseksi. Tämä johtuu proteiinin sitoutumisesta väriaineeseen. Sitä vastoin jos väriaineeseen ei ole sitoutuvaa proteiinia, värin muutosta ei esiinny, liuos saa punaruskean värin. Tämä väriaine pystyy muodostamaan vahvan, ei-kovalenttisen kompleksin proteiinin karboksyyliryhmän kanssa Van der Waalin voimien ja sähköstaattisten vetovoiman avulla.
Mitä eroa on BCA:n ja Bradford Assayn välillä?
BCA ja Bradford-määritys ovat kaksi määritysmenetelmää proteiinipitoisuuden määrittämiseksi. Näillä kahdella määrityksellä on erilaiset määritysperiaatteet ja erot niiden tarkkuudessa. Keskeinen ero BCA- ja Bradford-määrityksen välillä on, että BCA-määritys on aikaa vievä ja vähemmän tarkka, kun taas Bradford-määritys on nopea ja tarkka.
Seuraava infografiikka tiivistää BCA- ja Bradford-määrityksen erot taulukkomuodossa.
Yhteenveto – BCA vs Bradford Assay
BCA-määritys tai bikinkoniinihappomääritys on biokemiallinen määritys, joka on hyödyllinen määritettäessä proteiinin kokonaispitoisuutta liuoksessa. Bradford-määritys on spektroskooppinen analyyttinen menetelmä, joka on käyttökelpoinen liuoksen proteiinipitoisuuden mittaamisessa. Tärkein ero BCA- ja Bradford-määrityksen välillä on, että BCA on aikaa vievä ja vähemmän tarkka, kun taas Bradford-määritys on nopea ja tarkka.
