Avainero hiiva yksi -hybridin ja hiiva kaksi -hybridin välillä on se, että hiiva yksi -hybridi on in vitro -pohjainen määritys DNA-proteiinivuorovaikutusten analysoimiseksi, kun taas hiiva kaksi -hybridi on in vitro -pohjainen määritys proteiini-proteiinivuorovaikutusten analysoimiseksi.
Solumolekyylien välisten vuorovaikutusten tutkiminen voi auttaa määrittämään geenien ilmentymiseen ja proteiinireitteihin osallistuvia tunnistuskohtia. DNA ja proteiinien vuorovaikutukset ovat olennaisia soluprosesseissa, kuten DNA:n modifikaatioissa ja transkription säätelyssä jne. Toisa alta proteiinien ja proteiinien vuorovaikutuksella on elintärkeä rooli soluprosesseissa, kuten replikaatiossa, transkriptiossa, translaatiossa ja signaalinsiirrossa. Siksi on erittäin tärkeää tunnistaa nämä solumolekyylien vuorovaikutukset erilaisten määritysten avulla. Hiiva yksi hybridi ja hiiva kaksi hybridi ovat kaksi in vitro -pohjaista määritystä DNA-proteiini- ja proteiini-proteiini-vuorovaikutusten analysoimiseksi.
Mikä on Yeast One -hybridi?
Yeast one hybrid (Y1H) on in vitro -pohjainen määritys solunsisäisten DNA-proteiinivuorovaikutusten analysoimiseksi. Tämän menetelmän perustivat ensimmäisen kerran Wang ja Reed vuonna 1993. Siitä lähtien se on osoittanut suurempaa voimaa biologisessa tutkimuksessa. Tässä määrityksessä on kaksi pääkomponenttia: DNA-syötti ja proteiinisaalis.
Kuva 01: Yeast One -hybridi
Menettelyssä DNA-sekvenssi (DNA-syötti) kloonataan ensin kahden eri reportterin (HIS3, LacZ) ylävirtaan. Nämä reportterikonstruktit on integroitu hiivakannan genomiin. Transkriptiotekijät otetaan proteiinisaaliiksi. Transkriptiotekijät fuusioidaan hiivan Gal4-transkriptiotekijän transkription aktivaatiodomeeniin (AD) hybridiproteiinien valmistamiseksi. Tämä koko hybridiproteiini integroidaan plasmidiin ennen kuin se viedään hiivakantaan. Rekombinanttiplasmidin lisäämisen jälkeen, kun transkriptiotekijä on vuorovaikutuksessa DNA-fragmentin kanssa, AD-osa aktivoi reportterigeenin ilmentymisen (HIS3 tai LacZ). Plasmidien sekvensointi mahdollistaa sen transkriptiotekijän tunnistamisen, joka voi sitoutua DNA-fragmenttiin. Äskettäin hiiva one -hybridimenetelmää käytettiin sairauden diagnoosin tutkimiseen. Siksi tätä määritystä käytetään tulevaisuudessa laajemmin tieteellisessä tutkimuksessa ja lääketieteellisissä hoidoissa.
Mikä on Yeast Two -hybridi?
Yeast two hybrid (Y2H) on in vitro -pohjainen määritys solunsisäisten proteiinien ja proteiinien vuorovaikutusten analysoimiseksi. Tämän menetelmän löysivät alun perin Stanley Fields ja Ok-Kyu Song vuonna 1989. Tämä tekniikka havaitsee proteiini-proteiini-vuorovaikutukset käyttämällä hiivan Gal4-transkriptiotekijää.
Kuva 02: Yeast Two -hybridi
Tässä menetelmässä rakennetaan ensin kaksi fuusiota (hybridiä) käyttämällä kiinnostavia proteiineja: fuusioidaan toinen proteiini DNA:ta sitovaan domeeniin (DBD) ja fuusioidaan toinen proteiini Gal4-transkriptiotekijän aktivaattoridomeeniin (AD).. DBD:hen yhdistetty proteiini tunnetaan syöttinä, kun taas AD:n kanssa fuusioitu proteiini tunnetaan saaliina. Hiivakannassa syötin ja saaliin vuorovaikutuksessa DBD ja AD tuodaan lähelle toiminnallisen Gal4-transkriptiotekijän muodostamiseksi ylävirtaan reportterigeenistä. Toiminnallinen transkriptiotekijä aktivoi reportterigeenin ilmentymisen. Lisäksi tätä menetelmää käytetään tällä hetkellä integraalisten kalvoproteiinien vuorovaikutusten seulomiseen nisäkässoluissa.
Mitä yhtäläisyyksiä Yeast One Hybridin ja Yeast Two Hybridin välillä on?
- Yeast one -hybridi ja yeast two -hybridi ovat kaksi in vitro -pohjaista määritystä DNA-proteiini- ja proteiini-proteiinivuorovaikutusten analysoimiseksi.
- Näissä määrityksissä käytetään hiivakantoja.
- Molemmat määritykset käyttävät Gal4-transkriptiotekijän aktivaatiodomeenia (AD).
- He käyttävät reportterigeenin (HIS3 tai LacZ) ilmentymistä vuorovaikutusten havaitsemiseen.
- Heillä on syöttiä ja saalista.
- Molemmat määritykset ovat erittäin hyödyllisiä nykyaikaisessa biologisessa tutkimuksessa.
Mitä eroa on Yeast One -hybridillä ja Yeast Two -hybridillä?
Yeast one -hybridi on in vitro -pohjainen määritys DNA- ja proteiinivuorovaikutusten analysoimiseksi, kun taas hiiva kaksi hybridi on in vitro -pohjainen määritys proteiinien ja proteiinien vuorovaikutusten analysoimiseksi. Siten tämä on avainero hiiva yhden hybridin ja hiivan kahden hybridin välillä. Lisäksi hiivahybridissä syötti on DNA-fragmentti ja saalis on proteiinimolekyyli. Toisa alta hiivan kaksi hybridissä sekä syötti että saalis ovat proteiinimolekyylejä.
Alla olevassa infografiassa luetellaan hiiva yhden hybridin ja hiiva kaksi hybridin väliset erot taulukkomuodossa vierekkäin vertailua varten.
Yhteenveto – Yeast One Hybrid vs Yeast Two Hybrid
Yeast one -hybridi ja yeast two -hybridi ovat kaksi tärkeää in vitro -pohjaista määritystä. Hiiva yksi hybridi on in vitro -pohjainen määritys DNA- ja proteiinivuorovaikutusten analysoimiseksi, kun taas hiiva kaksi hybridi on in vitro -pohjainen määritys proteiinien ja proteiinien vuorovaikutusten analysoimiseksi. Siten tämä on avainero hiiva yhden hybridin ja hiiva kaksi hybridin välillä.
