Avainero insertio- ja korvausvektorien välillä on se, että insertiovektori pystyy insertoimaan kohtalaisen pituisia vieraita DNA:ta, kun taas korvausvektori pystyy vastaanottamaan suurempia pituuksia vierasta DNA:ta.
Fagivektorit ovat kloonaukseen käytettyjä bakteriofageja. Faagivektoreita on kahta tyyppiä; ne ovat insertiovektoria ja korvausvektoria. Lisäksi kaikki faagivektorit koostuvat ei-välttämättömistä geeneistä. Nämä geenit on kuitenkin poistettava faageista uusien vieraiden DNA-insertien helpottamiseksi.
Mikä on lisäysvektori?
Ensinnäkin insertiovektori on lambda-kloonausvektorien yksinkertaisin muoto. Itse asiassa se on eräänlainen faagivektori, jolla on ainutlaatuinen restriktiokohta lisättynä vektorin genomiin valinnaisen DNA:n kohtaan. Lisäksi faagi-DNA pysyy ilman poistumista. Tämä faagi-DNA:n poistamatta jättäminen rajoittaa vektoriin kloonattavien inserttien (vieraan DNA:n) kokoa. Lisäksi nämä vektorit ovat käyttökelpoisia cDNA:n kloonauksessa ja ilmentämisessä. GT10, GT11 ja Zap ovat esimerkkejä tästä vektorista.
Kuva 01: Lambda-faagi
Lisäysvektori koostuu yhdestä tunnistuspaikasta. Tämän vektorin ensisijainen tehtävä on kehittää cDNA-kirjastoja, jotka ovat peräisin eukaryoottisista mRNA-sekvensseistä. Lisäksi se voi vastaanottaa vain vieraan DNA:n pituuksia, jotka vaihtelevat välillä 05-11 kb. Sillä on myös ainutlaatuinen katkaisukohta vieraan DNA:n liittämistä varten.
Mitä ovat korvausvektorit?
Korvausvektori tai substituutiovektori on eräänlainen faagivektori, joka on kehitetty poistamalla faagi-DNA:n keskimmäinen "täytefragmentti"-alue. Haluttu vieras DNA-insertti korvaa faagi-DNA:n.
Kuva 02: Korvausvektori
Korvausvektorit ovat tärkeitä luotaessa genomisia kirjastoja, kuten EMBL4 ja Charon40. Nämä vektorit voivat vastaanottaa suuremman pituuden vieraan DNA:n välillä 08-24 kb. Täytealue koostuu myös geenistä, joka tekee faagivektorista elinkyvyttömän bakteeri-isännässä.
Mitä yhtäläisyyksiä lisäys- ja korvausvektorien välillä on?
- Insertio- ja korvausvektorit ovat faagivektoreita.
- Molemmat vektorit sisältävät vieraita DNA-inserttejä.
- Molemmat ovat hyödyllisiä DNA-kirjastojen luomisessa.
Mitä eroa on lisäys- ja korvausvektorien välillä?
Lisäys vs korvausvektorit |
|
| Insertiovektori on eräänlainen faagivektori, jossa on restriktiokohta lisättynä faagigenomiin valinnaisen DNA:n kohtaan. | Korvaava vektori on eräänlainen faagivektori, joka on kehitetty poistamalla faagi-DNA:n keskimmäinen "täytefragmentti"-alue |
| Lisäosien koko | |
| 05-11 kt pituus | 08-24 kt pituus |
| Filler Fragment | |
| Ei täyteainetta | Täytekappale korvataan vieraalla lisäyksellä |
| Toiminto | |
| Tärkeää cDNA-kirjastojen luomisessa | Tärkeää genomikirjastojen luomisessa |
| Esimerkkejä | |
| GT10, GT11 ja Zap ovat esimerkkejä | EMBL4 ja Charon40 ovat esimerkkejä |
| Leikkaussivusto | |
| Ainutlaatuinen pilkkoutumiskohta on olemassa | Leikkauskohta sisältää geenejä, jotka eivät ole välttämättömiä lyyttiselle syklille |
Yhteenveto – lisäys vs korvausvektorit
Sekä insertio- että korvausvektorit ovat kahdenlaisia faagivektoreita. Molemmilla vektoreilla on restriktiokohdat, jotka helpottavat uusien vieraiden DNA-inserttien mukauttamista. Insertiovektorit ovat tärkeitä cDNA-kirjastojen luomisessa, kun taas korvausvektorit ovat tärkeitä genomikirjastojen luomisessa. Lisäksi insertiovektorit sisältävät kohtalaisen pituisia DNA-inserttejä. Korvausvektorit voivat kuitenkin ottaa vastaan suurempia pituuksia vieraita DNA-insertejä. Kaiken kaikkiaan tämä on tärkein ero lisäys- ja korvausvektorien välillä.
