Avainero isokraattisen ja gradienttieluoinnin välillä on se, että isokraattinen eluointi viittaa vakiopitoisuuden ylläpitämiseen liikkuvassa faasissa, kun taas gradienttieluointi tarkoittaa vaihtelevan pitoisuuden ylläpitämistä liikkuvassa faasissa.
Kromatografiassa käytetään termejä isokraattinen ja gradienttieluointi. Kromatografian aikana käytämme liikkumatonta faasia, joka on liikkumatonta ainetta, sekä liikkuvaa faasia, liikkuvaa ainetta. Isokraattinen ja gradienttieluointi kuvaa liikkuvan faasin ominaisuuksia.
Mikä on isokraattinen eluointi?
Isokraattinen eluointi on termi, jota käytetään kromatografiassa, kun liikkuvan faasin pitoisuus on vakio. Tässä liikkuvan faasin pitoisuus on vakio koko kromatografisen prosessin ajan. Tässä prosessissa voimme havaita piikin leveyden kasvavan retentioajan myötä lineaarisesti kromatogrammissa. Tämä johtaa kuitenkin epäkohtaan – myöhään eluoituvat piikit myöhäisessä eluoinnissa tulevat hyvin litteiksi ja leveiksi. Siksi näitä leveitä huippuja on vaikea tunnistaa huipuiksi.
Lisäksi isokraattisessa eluutiossa selektiivisyys ei muutu kolonnin mittojen mukaan. Tämä tarkoittaa, että selektiivisyys ei riipu sarakkeen mittojen muutoksista. Tässä pituus ja halkaisija katsotaan kolonnin mitoiksi. Siksi piikit eluoituvat samassa järjestyksessä.
Mikä on Gradient Elution?
Gradienttieluointi on termi, jota käytetään kromatografiassa, kun liikkuvan faasin konsentraatio vaihtelee. Toisin sanoen liikkuvan faasin pitoisuuden ei tarvitse pysyä vakiona. Esimerkiksi HPLC:ssä yleinen erotusmenetelmä käyttää aluksi 10 % metanolia ja päättyy 90 %:iin lisäämällä pitoisuutta vähitellen. Liikkuvassa faasissa on kaksi komponenttia: heikko liuotin ja vahva liuotin. Heikko liuotin mahdollistaa liuenneen aineen eluoitumisen hitaasti, kun taas vahva liuotin aiheuttaa liuenneen aineen nopean eluoitumisen. Käänteisfaasikromatografiassa käytämme vettä heikona liuottimena ja orgaanista liuotinta vahvana liuottimena.
Kuva 01: HPLC
Lisäksi gradienttieluointimenetelmä vähentää myöhemmin eluoituvia komponentteja saadakseen ne eluoitumaan nopeammin, jolloin kromatogrammiin saadaan kapea piikin. Tämä menetelmä parantaa myös piikin muotoa ja korkeutta. Lisäksi gradienttieluointitekniikassa eluutiojärjestys muuttuu kolonnin mittojen muutosten mukaan.
Mitä eroa isokraattisella ja gradienttieluutiolla on?
Kromatografiassa käytetään termejä isokraattinen ja gradienttieluointi. Isokraattinen ja gradienttieluointi kuvaavat liikkuvan faasin ominaisuuksia. avainero isokraattisen ja gradienttieluoinnin välillä on se, että isokraattinen eluointi viittaa vakiopitoisuuden ylläpitämiseen liikkuvassa faasissa, kun taas gradienttieluointi viittaa vaihtelevan pitoisuuden ylläpitämiseen liikkuvassa faasissa.
Isokraattisessa eluointitekniikassa piikin leveys kasvaa retentioajan myötä lineaarisesti. Gradienttieluointitekniikassa kuitenkin myöhemmin eluoituvien komponenttien retentio vähenee, jolloin eluutio nopeutuu ja antaa kapeita piikkejä. Sitä paitsi isokraattisessa eluutiossa selektiivisyys ei riipu kolonnin mitoista, mutta gradienttieluutiossa selektiivisyys muuttuu kolonnin mittojen muuttuessa.
Seuraavassa taulukossa on yhteenveto isokraattisen ja gradienttieluoinnin eroista.
Yhteenveto – Isocratic vs Gradient Elution
Isokraattinen eluointi ja gradienttieluointi kuvaavat liikkuvan faasin ominaisuuksia. avainero isokraattisen ja gradienttieluoinnin välillä on se, että isokraattinen eluointi viittaa vakiopitoisuuden ylläpitämiseen liikkuvassa faasissa, kun taas gradienttieluointi viittaa vaihtelevan pitoisuuden ylläpitämiseen liikkuvassa faasissa.
