Avainero – RPMI vs DMEM
Useimmat tutkimukset liittyvät eläinsolujen viljelyyn, joten nämä tutkimukset vaativat eläinsolulinjojen ylläpitoa erityisissä kasvuolosuhteissa. Eläinsoluviljelyä tehdään laajasti farmakologisissa tutkimuksissa lääkeaineenvaihdunnan tunnistamiseksi, sairauksien diagnostiikassa ja syöpätutkimuksessa. Soluviljelyväliaine on tärkeä osa eläinsoluviljelyä. Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) ja Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) ovat kaksi eläinsoluviljelyssä käytettyä viljelyalustaa. RPMI on elatusaine, jota käytetään laajasti nisäkässolujen viljelemiseen suspensioviljelmässä. DMEM on muunneltu peruselatusaine, jonka aminohappo- ja vitamiinipitoisuudet ovat jopa nelinkertaiset. DMEM:ää käytetään solujen viljelemiseen tarttuvissa viljelmissä. Keskeinen ero näiden kahden median välillä on median kulttuurin tyyppi. RPMI:tä käytetään suspensioviljelmissä, kun taas DMEM:ää käytetään kiinnittyneiden solujen viljelemiseen.
Mikä on RPMI?
RPMI tai Roswell Park Memorial Institute Medium tunnetaan myös nimellä RPMI 1640. Median nimi on johdettu instituutista, jossa media löydettiin. Tätä väliainetta käytetään yleisesti eläinsoluviljelmässä, erityisesti nisäkässolujen kasvattamiseen. Ne kehitettiin alun perin ihmisen lymfosyyttien kasvattamiseen.
Seuraavat ainesosat sisältyvät RPMI:ään.
- Glukoosi
- pH-osoitin (fenolipunainen)\
- Suolat (natriumkloridi, natriumbikarbonaatti, dinatriumfosfaatti, kaliumkloridi, magnesiumsulfaatti ja kalsiumnitraatti)
- Aminohapot
- Vitamiinit (i-inositoli, koliinikloridi, paraaminobentsoehappo, foolihappo, nikotiiniamidi, pyridoksiinihydrokloridi, tiamiinihydrokloridi, kalsiumpantotenaatti, biotiini ja riboflaviini, syanokobalamiini)
RPMI:n erityispiirre on lisääntynyt fosfaattipitoisuus väliaineessa. RPMI:tä käytetään 5 % hiilidioksidiatmosfäärissä. Tämä tarjoaa suurimmat ja optimaaliset olosuhteet solujen kasvulle. Väliaineen pH pidetään arvossa 8,0 bikarbonaattipuskurointijärjestelmällä.
Kuva 01: Soluviljelmä petrimaljalla
RPMI:n sovellukset soluviljelyssä
- Ihmisen T- ja B-lymfosyyttien, luuydinsolujen ja hybridooman viljely.
- Käytetään ihmisen neoplastisten solujen tutkimiseen.
Mikä on DMEM?
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) on kaupallisesti valmistettu modifioitu alusta. Keskikokoisen jauheen alkuperäinen rakenne on keltainen. DMEM:ssä vitamiinipitoisuus kasvaa jopa nelinkertaiseksi, mikä lisää ravintoainepitoisuutta elatusaineessa.
DMEM on myös modifioitu lisäämällä suoloja, kuten ferrinitraattia, natriumpyruvaattia ja joitain ei-välttämättömiä aminohappoja, kuten seriiniä ja glysiiniä. Myös glukoosin koostumus väliaineessa muuttuu. Alkuperäinen formulaatio koostuu 1000 mg/l glukoosista, kun taas DMEM:ssä pitoisuus nostetaan 4500 mg/l:aan. DMEM vaatii myös seerumiväliaineen täydentämistä, koska se ei ole täydellinen alusta. Useimmiten DMEM:ää täydennetään fetal Bovine Serumilla (FBS). FBS tarjoaa tarvittavat proteiinit ja kasvutekijät viljelyprosessiin.
Alustan pH vaihtelee lisättäessä natriumbikarbonaattia. Alustan pH ennen natriumbikarbonaatin lisäämistä on noin 6,80 – 7,40, kun taas pH natriumbikarbonaatin lisäämisen jälkeen on välillä 7,60 – 8,20. Väliaineen säilytyslämpötila on 2–8 0C.
Kuva 02: DMEM
DMEM:n sovellukset
- Polyomaviruksen plakinmuodostuskyvyn tutkiminen hiiren alkiosoluissa.
- Kosketusinhibitiotutkimuksissa.
- Kanasoluviljelmien tutkimuksessa ja analysoinnissa.
Mitä yhtäläisyyksiä on RPMI:n ja DMEM:n välillä?
- Sekä RPMI:tä että DMEM:ää käytetään eläinsoluviljelmässä.
- Sekä RPMI- että DMEM-väliaineet ovat nestemäisiä formulaatioita.
- Sekä RPMI- että DMEM-alustat sisältävät kasvulle välttämättömiä aminohappoja, vitamiineja ja epäorgaanisia suoloja.
- Sekä RPMI- että DMEM-mediat ovat epätäydellisiä. Siksi seerumia tulee lisätä.
- Sekä RPMI- että DMEM-mediat käyttävät glukoosia hiilen lähteenä.
- Sekä RPMI- että DMEM-väliaineilla on korkeampi pH.
Mitä eroa on RPMI:n ja DMEM:n välillä?
RPMI vs DMEM |
|
| RPMI on alusta, jota käytetään laaj alti nisäkässolujen viljelemiseen suspensioviljelmässä. | DMEM on muunneltu peruselatusaine, jossa on lisääntynyt aminohappo- ja vitamiinipitoisuudet. |
| Ylimääräisiä fosfaatteja | |
| Esitä RPMI:ssä. | Poissa DMEM:stä. |
| Käytä | |
|
Käytetään solujen viljelemiseen kiinnittyneissä viljelmissä. Se on tottunut
|
| Kulttuurityypit | |
| RPMI:tä käytetään suspensioviljelmiin. | DMEM:iä käytetään viljelmille, joissa solut ovat kiinnittyneet. |
Yhteenveto – RPMI vs DMEM
Sekä RPMI:tä että DMEM:ää käytetään laaj alti eläinsoluviljelyssä erityisesti eläinsolulinjojen, mukaan lukien lymfosyyttien, viljelyyn in vitro. DMEM on modifioitu peruselatusaine, jossa on lisääntynyt ravintoainepitoisuus. Roswell Park Memorial Instituten kehittämä RPMI on myös elatusaine, jota käytetään eläinsolujen viljelyssä erityisesti nisäkkäiden lymfosyyteille. Molemmat mediat ovat kaupallisesti saatavilla. Tämä on ero RPMI:n ja DMEM:n välillä.
