Avainero kolorimetrisen ja fluorometrisen määrityksen välillä on se, että kolorimetrinen määritys määrittää värillisten yhdisteiden pitoisuuden liuoksessa, kun taas fluorometrinen määritys määrittää liuoksen kineettisen mekanismin.
Biokemiallinen määritys on tekniikka, joka havaitsee tai kvantifioi biologisen molekyylin tai aineen aktiivisuuden analyyttisesti. Se on in vitro -prosessi. Kolorimetrinen määritys ja fluorometrinen määritys ovat kahden tyyppisiä yleisiä biokemiallisia määrityksiä, jotka suoritetaan laboratorioissa. Useat tekniikat, kuten ELISA ja Western blot, ovat myös monimutkaisia biokemiallisia määrityksiä metabolisen aktiivisuuden kvantifiointiin ja biomolekyylien, kuten proteiinien, entsyymien ja muiden pienten molekyylien toiminnallisen käyttäytymisen mittaamiseen. Tämän tyyppisiä määrityksiä käytetään proteiini-DNA-, proteiini-RNA- ja proteiini-proteiini-vuorovaikutusten tunnistamiseen.
Mikä on kolorimetrinen määritys?
Kolimetrinen määritys on tekniikka, joka määrittää värillisten yhdisteiden pitoisuuden liuoksessa. Toisin sanoen kolorimetrinen määritys on reaktio, joka johtaa värin muutokseen reagenssien ja analyyttien välisen entsymaattisen tai kemiallisen reaktion seurauksena. Kolorimetrisiä määrityksiä käytetään biokemiassa entsyymien, spesifisten yhdisteiden, hormonien, vasta-aineiden ja muiden analyyttien testaamiseksi. He käyttävät kolorimetrejä tai spektrofotometrejä. Kolorimetrit ovat laitteita, jotka karakterisoivat värillisiä näytteitä saadakseen objektiivisen mittauksen väriominaisuuksista. Spektrofotometri on laite, joka mittaa valon voimakkuutta valon värin tai aallonpituuden funktiona.
Kuva 01: Kolorimetrinen määritys
Kuinka kolorimetrinen määritys toimii?
Kolimetrisessä määrityksessä valmistetaan levy, jossa tietty vasta-aine on sidottu kuoppiin. Sitten näyte lisätään. Tämä saattaa mahdollistaa näytteen sitoutumisen vasta-aineeseen. Sitten kuoppiin lisätään detektiovasta-aine ja substraatti reagoimaan detektiokoettimen kanssa. Pysäytysliuos lisätään lopussa ennen lukemista. Tyhjä kuoppa, jota kutsutaan tyhjäksi, jätetään ilman näytettä. Kolorimetrisessä määrityksessä mitä tummempi väri on, sitä suurempi on analyytin pitoisuus. Yleensä tarvitaan vain yksi aallonpituus lukemaan. Mutta jos on vertailumittaus, käytetään kahta tai useampaa aallonpituutta.
Mikä on fluorometrinen määritys?
Fluorometrinen määritys on tekniikka, joka määrittää entsyymireaktioiden kineettisen mekanismin. Fluorometrinen määritys tapahtuu muodostamalla fluoresoiva tuote ei-fluoresoivasta substraatista tai päinvastoin. Tässä määrityksessä hyödynnetään myös fluoresenssiresonanssienergian siirtoa (FRET), jossa entsymaattinen reaktio muuttaa kahden fluoroforin paikkaa substraatissa, mikä muuttaa fluoresenssin intensiteettiä.
Kuva 02: Fluorometrinen määritys
Fluorometriset määritykset ovat yleensä paljon herkempiä kuin muut määritykset. Potilaiden kudos-, solu- tai nestenäytteiden diagnostiset entsyymiarviot lisääntyvät sen suuremman herkkyyden vuoksi.
Kuinka fluorometrinen määritys toimii?
Fluorometrisessa määrityksessä levyllä olevaan näytteeseen lisätään substraattia ja fluoresenssivaste mitataan levynlukijalla. Tässä jokainen solu mitataan erikseen. Läpinäkymättömiä levyjä käytetään fluorometrisissa määrityksissä. Tämä vähentää valon sirontaa. Tämän tyyppiseen määritykseen tarvitaan kaksi aallonpituutta. Toinen aallonpituus on virityksen havaitsemiseen ja toinen emissio.
Mitä yhtäläisyyksiä kolorimetrisen ja fluorometrisen määrityksen välillä on?
- Kolimetrinen määritys ja fluorometrinen määritys ovat kahdenlaisia biokemiallisia määrityksiä.
- Molemmat määritykset tehdään lääketieteellistä diagnostiikkaa varten.
- Näihin määrityksiin liittyy entsymaattinen reaktio.
- Molemmissa määrityksissä käytetään substraattia ja analyyttejä.
Mitä eroa on kolorimetrisellä ja fluorometrisellä määrityksellä?
Kolimetrinen määritys on tekniikka, joka määrittää värillisten yhdisteiden pitoisuuden liuoksessa, kun taas fluorometrinen määritys on tekniikka, joka määrittää entsyymireaktioiden kineettisen mekanismin. Joten tämä on tärkein ero kolorimetrisen ja fluorometrisen määrityksen välillä. Lisäksi fluorometriset määritykset ovat herkempiä kuin kolorimetriset määritykset; näin ollen fluorometrisilla määrityksillä on kyky havaita enemmän analyyttejä. Siten tämä on toinen tärkeä ero kolorimetrisen ja fluorometrisen määrityksen välillä. Lisäksi fluorometriset määritykset vaativat kaksi aallonpituutta, kun taas kolorimetriset määritykset suoritetaan yhdellä aallonpituudella.
Alla oleva infografiikka taulukoi lisää eroja kolorimetrisen ja fluorometrisen määrityksen välillä.
Yhteenveto – Kolorimetrinen vs fluorometrinen määritys
Biokemiallinen määritys on analyyttinen prosessi, jota käytetään solujen metabolisten reaktioiden määrittämiseen ja kvantifiointiin. Kolorimetrinen määritys ja fluorometrinen määritys ovat kahdenlaisia biokemiallisia määrityksiä. Kolorimetrinen määritys on reaktio, joka johtaa värin muutokseen reagenssien ja analyyttien välisen entsymaattisen tai kemiallisen reaktion vuoksi, kun taas fluorometrinen määritys on tekniikka, jota käytetään entsyymireaktioiden kineettisen mekanismin määrittämiseen. Molemmat määritykset riippuvat entsymaattisesta reaktiosta, joka sisältää substraatin ja analyytin. Fluorometriset määritykset ovat herkempiä kuin kolorimetriset määritykset. Mikä tärkeintä, fluorometriset määritykset vaativat kaksi aallonpituutta, kun taas kolorimetriset määritykset voidaan suorittaa vain yhdellä aallonpituudella. Näin ollen tämä tekee yhteenvedon erosta kolorimetrisen ja fluorometrisen määrityksen välillä.
