Avainero kaatolevyn ja levityslevyn välillä on, että tunnettu tilavuus näytettä levitetään levityslevyn agar-alustan pinnalle, kun taas kaatolevyssä tunnettu tilavuus näytettä sekoitetaan agar ja kaadettiin sitten lautaselle. Kun verrataan näiden kahden tekniikan tarkkuutta, kaatolevyllä on suurempi tarkkuus kuin levityslevyllä.
Vakiolevylaskentamenetelmä on kasvuun perustuva lähestymistapa, joka laskee elävien (kasvavien/viljelykelpoisten/elinkykyisten) mikro-organismien määrän näytteessä. Se on tehokas menetelmä, jota käytetään monilla mikrobiologian aloilla elävien mikro-organismien määrän analysoimiseksi. Sellaiset alat kuin elintarvike- ja meijeriteollisuus, lääketiede, ympäristö, vesi ja maatalous, mikrobigenetiikka, molekyylimikrobiologia, kasvualustakehitys ja biotekniikka (bioreaktoritekniikka, käyminen, jätteiden/jätevesien käsittely jne.) käyttävät tätä tekniikkaa. Lisäksi on kaksi päätapaa suorittaa vakiolevyjen laskeminen: ne ovat levityslevytekniikka ja kaatolevytekniikka.
Mikä on Pour Plate?
Kaatolevytekniikka on mikrobimenetelmä, jolla luetellaan näytteessä olevia eläviä soluja. Kaatolevymenetelmän erikoisuus on, että tunnettu tilavuus näytettä sekoitetaan ensin agarin kanssa ja kaadetaan sitten levylle.
Kuva 01: Kaada lautanen
Muut vaiheet ovat samanlaisia kuin seuraavassa osiossa käsitelty levityslevytekniikka. Seuraava vaihe näytteen kanssa sekoitetun agarin kaatamisen jälkeen on antaa sen jähmettyä ja inkuboitua. Inkuboinnin jälkeen elävien pesäkkeiden lukumäärän laskeminen on välttämätöntä lopullisen CFU:n laskemiseksi 1 g:lle tai 1 ml:lle.
Mikä on levityslevy?
Levityslevy on tekniikka elävien solujen luetteloimiseksi näytteestä. Tätä tekniikkaa varten näytteen sarjalaimennus on tarpeen sen varmistamiseksi, että vähintään yksi synnyttää laskettavan määrän pesäkkeitä. Prosessi tässä on pipetoida määrätty määrä laimennusta agarlevyn pinnalle ja levittää se nopeasti ja tasaisesti agar-pinnalle lasilevittimellä, joka on poltettu ja jäähdytetty alkoholilla. Toistojen suorittaminen on välttämätöntä luotettavan keskiarvon saamiseksi. Seuraava vaihe on kuivata nämä levyt lyhyen aikaa, käännä ne sitten ylösalaisin ja aseta ne inkubaattoriin sopivaan lämpötilaan kasvua varten ja tietyn inkubointiajan ajaksi.
Kuva 02: Levityslevy
Inkuboinnin jälkeen levyjen tutkiminen osoittaa kasvun. Yhdellä tai useammalla laimennuksella ymppäysaineissa olevien solujen lukumäärä (esim. 100 tai 200 µl) saa aikaan 30-300 erillistä pesäkettä agarin pinnalle. Alle 30 pesäkemäärät ovat tilastollisesti epäluotettavia. Yli 300:n lukemia on vaikea laskea ja ne ovat alttiita virheille.
Mitä yhtäläisyyksiä kaatolevyn ja levityslevyn välillä on?
- Levityslevy ja kaatolevy ovat kaksi tekniikkaa näytteessä olevien elävien solujen määrän saamiseksi.
- Molemmat ovat suoria menetelmiä.
- Otosvirheitä voi tapahtua molemmissa menetelmissä.
- Kasvuolosuhteiden rajoitukset vaikuttavat molempien menetelmien tuloksiin.
- Tekniset virheet voivat myös häiritä molempien menetelmien lopputulosta.
- Vaikka nämä kaksi menetelmää ovat elinkelpoisia, niitä ei käytetä viljelmättömien bakteerien kasvattamiseen.
Mitä eroa on kaatolevyllä ja levityslevyllä?
Kaatolevy on mikrobitekniikka, jolla luetellaan useita eläviä soluja näytteessä. Levityslevytekniikka on toinen tekniikka alustan pinnalla kasvaneiden bakteerien laskemiseksi. Kaatolevytekniikassa prosessi on lisätä näyte valulevyn jähmettyneelle väliainepinnalle. Spred-levytekniikassa prosessi on kuitenkin sekoittaa näyte sulaan agariin ja kaada se sitten levylle.
Näiden kahden tekniikan tarkkuuden os alta kaatolevyllä on suurempi tarkkuus kuin levityslevyllä. Lisäksi, toisin kuin kaatolevyssä, lasilevittimellä näyte levitetään tasaisesti levityslevyn pinnalle. Lisäksi kaatolevyä käyttämällä on mahdollista luetella aerobit, anaerobit ja fakultatiiviset anaerobit. Levityslevyä käyttämällä on kuitenkin mahdollista vain luetella aerobit. Lisäksi jähmettyneet agarlevyt ovat välttämättömiä levityslevyjen tekemiseen, kun taas nestemäiset sulat agar-alustat ovat tarpeen kaatomenetelmässä.
Yhteenveto – Kaatolevy vs levityslautanen
Kaatolevy ja levityslevy ovat kaksi mikrobiologian tekniikkaa, jotka helpottavat mikrobisolujen laskemista näytteessä. Molemmat menetelmät perustuvat kasvuun, joten mittaa eläviä soluja. Kaatolevyn aikana tunnettu tilavuus näytettä sekoitetaan sulaan agariin ja kaadetaan levylle. Levityslevyn aikana tunnettu tilavuus levitetään jähmettyneen agar-alustan pinnalle. Tämä on ero kaatolevyn ja levityslevyn välillä.
