Avainero bradfordin ja Lowryn proteiinimäärityksen välillä on se, että Bradfordin proteiinimääritys perustuu Coomassie briljanttisinisen G-250:n absorbanssisiirtymään, kun taas Lowryn proteiinimääritys perustuu kupari-ionien (Cu+) -ionien reaktioon. syntyy hapettamalla peptidisidoksia Folin-Cioc alteu-reagenssilla.
Määritys on analyyttinen tekniikka, joka auttaa karakterisoimaan näytteen tärkeimmät toiminnalliset komponentit. Näin ollen määritys voi olla joko kvalitatiivinen tai kvantitatiivinen testi. Monet alat, mukaan lukien laboratoriolääketiede, farmakologia, ympäristöbiologia, molekyylibiologia, biokemia ja immunologia, käyttävät tällaisia määrityksiä rutiininomaisesti. Bradford- ja Lowry-proteiinimääritys ovat kaksi biokemiallista määritystä, jotka määrittävät proteiinipitoisuuden näyteliuoksessa. Molemmissa määrityksissä käytetään kolorimetrisiä tekniikoita tulosten saamiseksi.
Mikä on Bradford Protein Assay?
Bradfordin proteiinimääritys on nopea spektroskooppinen analyyttinen menetelmä proteiinianalyysiin. Se osoittaa suurta tarkkuutta mitattaessa liuoksen proteiinipitoisuutta. Marion Bradford esitteli tämän menetelmän vuonna 1976. Tässä määrityksessä kokonaisreaktio perustuu mitattujen proteiinien aminohappokoostumukseen. Toisin sanoen Bradford-proteiinimääritys on kolorimetrinen määritys. Se käyttää väriainetta Coomassie briljanttisininen. Tästä syystä tämä kolorimetrinen proteiinimääritys riippuu väriaineen absorbanssisiirtymästä. Coomassie briljanttisinistä G-250:tä on kolmessa muodossa: kationinen (punainen), anioninen (sininen) ja neutraali (vihreä). Happamissa olosuhteissa väriaineen punainen muoto muuttuu siniseksi. Se vahvistaa proteiinin sitoutumisen. Jos proteiinia ei ole läsnä, liuos voi jäädä ruskeaksi.
Kuva 01: Bradfordin proteiinimääritys
Bradfordin proteiinimääritys eroaa muista proteiinimäärityksistä, koska se on vähemmän herkkä proteiiniliuoksessa olevien erilaisten kemiallisten yhdisteiden häiriöille. Näitä yhdisteitä ovat natrium, kalium, glukoosi ja sakkaroosi jne.
Mikä Lowry Protein Assay on?
Lowryn proteiinimääritys on biokemiallinen määritys, jota käytetään liuoksen proteiinin kokonaistason määrittämiseen. Oliver H. Lowry on henkilö, joka kehitti tämän reagenssin vuonna 1940. Menettely kuvaa liuoksen kokonaisproteiinipitoisuutta värinmuutoksella, joka on verrannollinen liuoksen proteiinipitoisuuteen. Siksi tämä on myös kolorimetrinen proteiinimääritys.
Peptidisidosten hapettumisesta muodostuvien kupari-ionien (Cu+) ja Folin–Cioc alteu-reagenssin välinen reaktio on tämän menetelmän perusta. Tämä reagenssi sisältää myös fosfomolybdeenihappoa ja fosfori-volframihappoa. Lowryn proteiinimäärityksen reaktiomekanismia ei kuitenkaan tunneta hyvin. Mutta siihen liittyy kysteiinin, tryptofaanin ja tyrosiinijäämien hapettuminen Folin-Cioc alteu-reagenssin pelkistyksellä.
Kuva 02: Lowryn proteiinimääritys
Kysteiinitähteet myötävaikuttavat Lowryn proteiinimäärityksessä havaittuun absorbanssiin ja reaktio johtaa loistavan siniseen molekyyliin; heteropolymolybdeenisininen. Tämän molekyylin pelkistyminen mitataan absorbanssilla 660 nm:ssä. Tästä syystä Folin–Cioc alteu-reagenssia pelkistävien kysteiini- ja tryptofaanitähteiden pitoisuus päättelee proteiinin kokonaispitoisuuden liuoksessa.
Mitä yhtäläisyyksiä on Bradfordin ja Lowryn proteiinimäärityksen välillä?
- Bradfordin ja Lowryn proteiinimääritykset määrittävät liuoksen proteiinipitoisuuden.
- Molemmat menetelmät ovat kolorimetrisiä menetelmiä.
- Lisäksi molempien menetelmien herkkyys on korkea.
Mitä eroa on Bradfordin ja Lowryn proteiinimäärityksen välillä?
Bradford- ja Lowry-proteiinimääritys ovat kahden tyyppisiä määrityksiä, jotka määrittävät liuoksen proteiinipitoisuuden. Bradfordin proteiinimääritys perustuu Coomassie briljantinsinisen G-250:n absorbanssisiirtymään, kun taas Lowryn proteiinimääritys riippuu peptidisidosten hapettumisesta muodostuvien kupari-ionien reaktiosta Folin-Cioc alteu-reagenssin kanssa. Joten tämä on avainero Bradfordin ja Lowryn proteiinimäärityksen välillä. Bradford-proteiinimääritys kestää 15 minuuttia, kun taas Lowery-proteiinimääritys kestää 40–60 minuuttia. Siten tämä on toinen ero Bradfordin ja Lowryn proteiinimäärityksen välillä. Lisäksi Bradfordin proteiinimääritys on riippuvainen aminohappokoostumuksesta, kun taas Lowryn proteiinimääritys on osittain riippuvainen aminohappokoostumuksesta. Näin ollen tämä on myös ero Bradfordin ja Lowryn proteiinimäärityksen välillä.
Alla inforafiassa on lisätietoja Bradfordin ja Lowryn proteiinimäärityksen eroista.
Yhteenveto – Bradford vs Lowry Protein Assay
Määritys on analyyttinen tekniikka, jota käytetään karakterisoimaan näytteen pääasiallinen toiminnallinen komponentti. Bradford- ja Lowry-proteiinimääritys ovat kahden tyyppisiä proteiinimäärityksiä, jotka toimivat kolorimetrisillä tekniikoilla. Sekä Bradfordin että Lowryn proteiinimääritykset määrittävät proteiinipitoisuuden liuoksessa. Tärkein ero Bradfordin ja Lowry Protein Assayn välillä on kuitenkin niiden käyttämä kolorimetrinen tekniikka. Bradfordin proteiinimäärityksessä käytetään Coomassie briljantinsinistä G-250:tä, kun taas Lowryn proteiinimäärityksessä kupari-ioneja (Cu+) ja Folin-Cioc alteu-reagenssia. Lisäksi Bradford-menetelmä antaa nopeat tulokset kuin Lowryn proteiinimääritys. Molemmat menetelmät ovat kuitenkin erittäin herkkiä menetelmiä, ja ne ovat alttiina useille eri aineille.
