Avainero – RNASE A vs RNASE H
Ribonukleaasit ovat nukleaaseja, jotka spesifisesti hajottavat RNA:n pienemmiksi yksiköiksi. Ne voidaan jakaa kahteen luokkaan; endoribonukleaasit ja eksoribonukleaasit. Endoribonukleaasi on endonukleaasi, joka voi joko hajottaa yksijuosteisen tai kaksijuosteisen RNA:n. Se katkaisee fosfodiesterisidokset RNA:n polynukleotidiketjussa. Esimerkkejä ovat RNaasi A, RNaasi III, RNaasi T1, RNaasi P ja RNaasi H. Eksoribonukleaasi on eksonukleaasi, joka hajottaa RNA:ta poistamalla terminaaliset nukleotidit joko RNA-molekyylin 5'- tai 3'-päästä. Esimerkkejä ovat RNaasi R, RNaasi II, RNaasi D ja RNaasi PH.avainero RNASE A:n ja RNASE H:n välillä on, että RNaasi A on haiman ribonukleaasi, joka hajottaa spesifisesti yksijuosteisen RNA:n pienemmiksi komponenteiksi, kun taas RNaasi H on epäspesifinen entsyymi, joka pilkkoo RNA:n RNA-DNA-hybridissä pienemmiksi yksiköiksi. hydrolyyttinen mekanismi.
Mikä on RNASE A?
RNaasi A on haiman ribonukleaasi, joka pilkkoo spesifisesti parittomat sytosiini- ja urasiilitähteet yksijuosteisen RNA:n 3'-päästä. RNaasi H toimii korkeammalla suolapitoisuudella (0,3 M tai korkeampi NaCl-pitoisuus). Hydrolyyttinen reaktio on kaksivaiheinen. Se muodostaa 3' fosforyloidun tuotteen 2', 3' syklisen monofosfaattivälituotteen kautta. Vaikka se on spesifinen yksijuosteiselle RNA:lle korkeammalla suolapitoisuudella, se voi myös hajottaa kaksijuosteista RNA:ta ja RNA:ta RNA-DNA-hybridissä pienemmässä NaCl-pitoisuudessa (alle 0,3 M NaCl).
Bruce Merrifield syntetisoi ensimmäisen kerran tämän entsyymin. RNaasi A on erittäin suosittu entsyymi molekyylitutkimuksessa. Naudan haiman RNaasi A on esimerkki RNaasi A:sta. Se on yksi kestävimmistä laboratoriossa käytetyistä entsyymeistä. Tämä entsyymi ei tarvitse kofaktoria toimintaansa varten. Se on erittäin lämpöstabiili entsyymi. RNaasi A on ensimmäinen entsyymi ja kolmas proteiini, jolle havaittiin oikea aminohapposekvenssi. Tämä entsyymi on hyvin pieni, ja siinä on 124 aminohappoa ja molekyylimassa 12 600 da. Ja siinä on neljä histidiinitähdettä (His 12 ja His 119, jotka osallistuvat katalyyttiseen reaktioon).
Kuva 01: RNaasi A
RNaasi A voidaan eristää keittämällä raakanäyte. Kiehuessaan kaikki muut entsyymit hajottavat jäljellä olevan RNaasi A:n. RNaasi A on hämmästyttävän vakaa entsyymi. Tämä entsyymi estää ribonukleaasi-inhibiittoriproteiinia, raskasmetalli- ja uridiinivanadaattikomplekseja.
Mikä on RNase H?
RNaasi H on epäspesifinen ribonukleaasientsyymi, joka voi hajottaa RNA:ta RNA-DNA-hybridissä hydrolyyttisellä reaktiolla. RNaasi H katkaisee RNA:n 3'- O-P-sidoksen RNA-DNA-hybridissä. Lopulta se tuottaa 3'OH- ja 5'-fosfaattipääteisiä tuotteita. DNA:n replikaatiossa sillä on keskeinen rooli poistamalla RNA-alukkeen uusien DNA-säikeiden muodostumisen jälkeen. Laboratorio-olosuhteissa se hajottaa spesifisesti RNA:ta RNA-DNA-hybridissä, mutta ei DNA:ta ja hybridisoimatonta RNA:ta. Ja tätä entsyymiä käytetään yleensä tuhoamaan RNA-templaatti sen jälkeen, kun ensimmäinen komplementaarinen DNA-juoste on muodostunut cDNA-synteesin aikana.
Kuva 02: RNase H
RNaasi H:tä käytetään myös nukleaasisuojausmäärityksissä. Se voidaan myös sisällyttää poly-A-hännän poistamiseen mRNA:sta. RNaasi H:lla on kyky tuhota ei-koodaavaa RNA:ta solun sisällä ja ulkopuolella. Metalli-ioneja tarvitaan tämän proteiiniaktiivisuuden kofaktoreina. Kelaattoria (EDTA) voidaan käyttää estämään RNaasi H -entsyymiä.
Mitä yhtäläisyyksiä on RNASE A:n ja RNASE H:n välillä?
- Molemmat ovat luonteeltaan proteiinia.
- Molemmat ovat endoribonukleaasia
- Molemmat voivat hajottaa RNA:ta.
- Molemmat suorittavat hydrolyyttisiä reaktioita.
- Molekyylilaboratoriot käyttävät molempia näitä.
Mitä eroa on RNASE A:n ja RNASE H:n välillä?
RNASE A vs RNASE H |
|
| RNaasi A on haiman ribonukleaasi, joka pilkkoo spesifisesti yksijuosteisen RNA:n parittomien sytosiini- ja urasiilitähteiden 3'-pään korkeammalla suolapitoisuudella. | RNaasi H on epäspesifinen ribonukleaasientsyymi, joka voi hajottaa RNA:ta RNA-DNA-hybridissä hydrolyyttisellä reaktiolla. |
| RNA:n pilkkomisen luonne | |
| RNaasi A pilkkoo spesifisesti yksijuosteisen RNA:n korkeammalla suolapitoisuudella. | RNaasi H pilkkoo RNA:ta RNA-DNA-hybridissä. |
| Käsitekijöiden tarve toiminnalle | |
| RNaasi A ei tarvitse kofaktoreita toimintaansa. | RNaasi H tarvitsee metalli-ioneja kofaktoreina toimintaansa. |
| Proteiiniaktiivisuuden estäjät | |
| Ribonukleaasi-inhibiittoriproteiini, raskasmetalli- ja uridiinivanadaattikompleksit estävät RNAaasi A -aktiivisuutta. | Kelaattori (EDTA) estää RNaasi H -aktiivisuutta. |
| RNA-alukkeen poisto DNA-replikaatiossa | |
| RNaasi A:ta ei käytetä RNA-alukkeen poistamiseen DNA-replikaatiossa. | RNaasi H:ta käytetään RNA-alukkeen poistamiseen DNA-replikaatiossa |
| DNA-mallipohjan poisto komplementti-DNA (C-DNA) -synteesissä | |
| RNaasi A:ta ei käytetä RNA-templaatin poistamiseen komplementaarisen DNA:n (C-DNA) synteesin aikana. | RNaasi H:ta käytetään RNA-templaatin poistamiseen komplementaarisen DNA:n (C-DNA) synteesin aikana. |
| Poly-A-Tail:n poistaminen mRNA:sta, joka on hybridisoitu oligoon (dt) | |
| RNaasi A:ta ei käytetä "poly-A-häntä" poistamiseen oligoon (dt) hybridisoidusta mRNA:sta. | RNaasi H:tä käytetään "poly-A-häntä" poistamiseen mRNA:sta, joka on hybridisoitunut oligoon (dt) |
Yhteenveto – RNASE A vs RNASE H
Ribonukleaasit ovat nukleaasientsyymejä, joilla on kyky pilkkoa RNA:ta pienemmiksi yksiköiksi. Niitä on kahta tyyppiä; endoribonukleaasit ja eksoribonukleaasit. Endoribonukleaasi on endonukleaasi, jolla on kyky hajottaa yksijuosteista tai kaksijuosteista RNA:ta. Ja se katkaisee fosfodiesterisidoksen RNA:n polynukleotidiketjussa. RNaasi A ja RNaasi H ovat kaksi endoribonukleaasia. RNaasi A on haiman ribonukleaasi, joka spesifisesti pilkkoo parittomia sytosiini- ja urasiilitähteitä yksijuosteisen RNA:n 3'-päästä korkeammalla suolapitoisuudella. RNaasi H on epäspesifinen ribonukleaasientsyymi, joka voi hajottaa RNA:ta RNA-DNA-hybridissä hydrolyyttisellä reaktiolla. Tämä on ero RNaasi A:n ja RNaasi H:n välillä.
Lataa PDF RNASE A vs RNASE H
Voit ladata tämän artikkelin PDF-version ja käyttää sitä offline-tarkoituksiin lainaushuomautuksen mukaisesti. Lataa PDF-versio tästä Ero RNASE A:n ja RNASE:n välillä H
