Avainero solujen kokonaismäärän ja elävien solujen määrän välillä on se, että solujen kokonaismäärä arvioi kaikki näytteen solut, mukaan lukien sekä elävät että kuolleet mikrobisolut, kun taas elävien solujen määrä arvioi vain näytteen elävät mikrobisolut.
Populaatiossa olevien organismien määrän laskeminen katsotaan tarpeelliseksi useimmissa kokeellisissa töissä. Siksi yritämme analysoida mikrobien määrää näytteessä suorilla ja epäsuorilla menetelmillä. Suorat mittaukset sisältävät menetelmiä, jotka laskevat solujen lukumäärän suoraan. Epäsuorat mittaukset sisältävät joidenkin solujen määrään liittyvän parametrin mittaamisen, kuten solutiheyden, kuivapainon jne. Jotkut menetelmät kvantifioivat vain näytteen elävät mikrobisolut. Elinkykyisten solujen lukumäärä on yksi tällainen menetelmä. Suorat mikroskooppiset laskennat kvantifioivat kaikki solut tunnetussa tilavuudessa elatusainetta/näytettä mikroskoopilla. Siksi se laskee sekä elävät että kuolleet solut. Se on eräänlainen solujen kokonaismäärä.
Mikä on solujen kokonaismäärä?
Solujen kokonaismäärä on menetelmä, jossa lasketaan kaikki solut tunnetussa tilavuudessa elatusainetta/näytettä käyttäen mikroskooppia ja laskentakammiota (hemosytometriä). Toisin kuin elinkelpoiset solut, sekä elävät että kuolleet solut lasketaan. Siksi tämä on kokonaismäärä, ellei havainnoinnin aikana käytetä elinkelpoisuusvärjäystä. Mikroskoopissa soluja tarkkaillaan suoraan mikroskoopin alla ja lasketaan. Se käyttää solususpensiota, joka koostuu mikrobisoluista. Laskemisen ja tarkkojen mittausten helpottamiseksi voidaan tehdä näytteen laimentaminen. Hyvin korkeissa/pienissä solupitoisuuksissa solujen kokonaismäärän saaminen mikroskoopilla on vaikea tehtävä.
Kuva 01: Laskentakammio – hemosytometri
Laskurikammiot ovat helppoja, edullisia ja nopeita mittaamaan solujen kokonaismäärän. Mikä tärkeintä, laskentakammiot ovat hyödyllisiä sekä eukaryoottien että prokaryoottien laskemiseen. Laskemme solut valituissa neliöissä, joiden tilavuus tunnetaan, jotta voidaan määrittää solujen kokonaismäärä.
Mikä on elävien solujen määrä?
Elävien solujen laskenta on menetelmä elävien mikrobisolujen laskemiseksi näytteestä. Se laskee vain näytteen elävät solut. Elinkykyisten solujen lukumäärä, kalvosuodatus ja todennäköisin luku ovat vain muutamia elinkelpoisia solujen laskentatekniikoita. Nämä lähestymistavat perustuvat kasvuun. Elinkykyinen verihiutalelaskentamenetelmä on tehokas menetelmä, jota käytetään monilla mikrobiologian aloilla, mukaan lukien elintarvike- ja maitomikrobiologia, lääketieteellinen mikrobiologia, ympäristömikrobiologia, mikrobigenetiikka, kasvualustakehitys ja biotekniikka.
Yleisin tapa laskea eläviä bakteereja on käyttää näytettä, joka pystyy muodostamaan pesäkkeitä agar-elatusaineella. Levylaskennan suorittamiseen on kaksi päätapaa: levityslevytekniikka ja kaatolevytekniikka. Tunnettu tilavuus näytettä voidaan joko levittää agarmaljan pinnalle tai sekoittaa agariin. Sitten levyä inkuboidaan ja muodostuneet pesäkkeet lasketaan. Pesäkkeiden lukumäärä liittyy alkuperäisen näytteen mikro-organismien määrään. Elinkykyisten määrät mittaavat vain niitä soluja, jotka ovat elossa ja kasvavat.
Kuva 02: Elinkelpoisten levyjen määrä
Todennäköisin luku (MPN) on vaihtoehto levylaskentamenetelmille elävien solujen populaatiotiheyden arvioimiseksi. Se laskee nesteviljelmässä kasvavia organismeja ja on siten pääasiassa bakteriologinen tekniikka. Se on erityisen hyödyllinen pienille organismipitoisuuksille, esim. maito, juomavesi.
Kalvosuodatustekniikka sopii paremmin, kun mikrobit ovat hyvin laimeita kuten kaupungin vesihuollossa. Se tehdään yksinkertaisesti johtamalla tunnettu tilavuus nestettä suodattimen läpi ja inkuboimalla sitä ravintoalustalla. Suodattimelle kehittyvät pesäkkeet lasketaan ja bakteerit millilitraa kohden näytettä lasketaan.
Mitä yhtäläisyyksiä solujen kokonaismäärän ja elävien solujen määrän välillä on?
- Solujen kokonaismäärä ja elävien solujen määrä ovat kahden tyyppisiä mikrobitekniikoita, jotka mittaavat solut.
- Ne ovat yleisesti käytettyjä laskentamenetelmiä mikrobiologian laboratorioissa.
Mitä eroa on kokonaissolumäärällä ja elävien solujen määrällä?
Solujen kokonaismäärä laskee kaikki näytteen elävät ja kuolleet mikrobisolut. Sitä vastoin elävien solujen määrä laskee vain näytteen elävät solut. Joten tämä on avainero solujen kokonaismäärän ja elävien solujen määrän välillä. Solujen kokonaismäärä on riippumaton pesäkkeiden kasvusta agarmaljoilla, kun taas elävien solujen lukumäärä on kasvuun perustuva tekniikka ja riippuu mikrobipesäkkeiden kasvusta agarmaljoilla.
Alla olevassa tietokaaviossa on yhteenveto solujen kokonaismäärän ja elävien solujen määrän välillä.
Yhteenveto – Solujen kokonaismäärä vs. elävien solujen määrä
Solujen kokonaismäärä laskee sekä elävät että kuolleet mikrobisolut, kun taas elävien solujen määrä laskee vain elävät solut. Näin ollen tämä on avainero solujen kokonaismäärän ja elävien solujen määrän välillä. Myös elinkelpoisten solujen lukumäärä on kasvuun perustuva tekniikka, toisin kuin solujen kokonaismäärä. Lisäksi se vaatii levyjen inkubointia näkyvien pesäkkeiden saamiseksi. Elinkykyisten solujen lukumäärä, MPN ja kalvosuodatus ovat muutamia tekniikoita elävien solujen laskemiseen, kun taas suora mikroskopia ja hemosytometrin käyttö ovat kaksi tekniikkaa kokonaissolujen laskemiseen.
